3组,猪带绦虫基因工程疫苗的研究进展

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1、猪带绦虫基因工程疫苗的研究进展才学鹏(中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046)【摘要】猪带绦虫病是一种重要的政治经济病。研制有效、安全的疫苗是该病研究的热点。随着分子生物技术的发展，基因工程疫苗已成为该领域研究的重点。目前，猪带绦虫重组抗原疫苗、核酸疫苗和合成肽疫苗等研究已取得较大的进展，在噬菌体疫苗和活载体疫苗等方面也做了许多尝试，取得了很好的效果。猪带绦虫重组抗原疫苗发展较快。有望在近几年上市，而其它类型疫苗还有诸多的问题要解决，其商品化进程尚需很长一段时间。猪

2、囊尾蚴病虫作为一种重要的人兽共患寄生虫猪带绦虫分为亚洲和非洲/拉丁美洲两个基因型。亚洲病，不仅对养猪业造成重大的经济损失，还严重危害基因型主要包括中国和印度等地方株，非洲/拉丁美洲人类的健康。近期的流行病学资料显示，美墨边境猪两个基因型主要包括墨西哥和厄瓜多尔等地方株。才带绦虫病的感染率达3%，在美国加尼佛尼亚州部分学鹏、贾万忠等根据羊绦虫45W设计引物，克隆了猪地区，猪囊尾蚴病的血清阳性率高达1.8%，表明猪带带绦虫中国株TS045WA、B、C三型转录本共16个。绦虫病有重新抬头的趋势。尽管驱虫药在控制猪囊尾比较发现，猪带绦虫中

3、国株和墨西哥株之间的蚴和人绦虫感染中均发挥过重要作用，但化学药物的TS045W-4B和TS045W一1C的相似性达100%，非常长期使用出现的药物残留和对环境安全的危害的问题保守，而其它的转录本之间都存在明显的变异。研究日益突出。传统的全囊虫抗原、分泌，1弋谢(E/S)抗证明，经过修饰的45W--4B不仅能在大肠杆菌中实现原、异源抗原以及六钩蚴抗原疫苗都能对囊虫病起到高效可溶性表达，表达产物在4稳定保存3个月，而很好的预防作用，但都不能通过体外培养增殖，因而且对猪的减虫率达94.0%以上。上述结果提示，来源受到极大地限制。因此，研

4、制安全、有效的基因45W-4B蛋白是良好的疫苗候选抗原，45W-4B疫苗工程疫苗已成为猪囊虫疫苗的主要发展方向，具有广阔的应用前景。经过二十多年的努力，目前在该领域已取得了很大的进展。以DIG标记的T018eDNA为探针，与猪带绦虫六钩蚴表达文库杂交，筛选出TSOLl8克隆，与T018、1重组抗原疫苗TSAl8cDNA序列比较，TSOLl8eDNA3端非翻译区有随着寄生虫生物学、免疫学和分子生物学等与疫17个核苷酸的缺失，推测TSOLl8表达的蛋白可能具苗开发相关学科研究的深入，用免疫化学分析方法鉴有宿主保护性，具有开发实用疫苗的

5、潜力。Flisser等定宿主保护性抗原，应用重组DNA技术生产疫苗抗原用200斗gTSOLl8的大肠杆菌表达产物免疫猪，在三已成为可能。同时棘球蚴和羊囊虫重组抗原疫苗的问个独立的疫苗实验中均获得了几乎100%的保护。为世，为其他绦虫病新型疫苗的研究提供了典范。了提高重组TSOLl8抗原的稳定性，袁改玲等通过对1989年Johnson等首先开发了羊绦虫(Zovis)TSOLl8基因修饰和对部分密码子的改造，实现了该基重组45W抗原疫苗，对羊的保护率达98.O%。45W-GST因在毕赤酵母中的高效表达，表达量达2.59/L，而且疫苗的

6、效果已在新西兰得到确证，无论是自然感染或表达产物分泌到培养液上清中，通过离心和凝胶层析实验攻击感染的保护率都在90.0%以上。绦虫抗原具即可得到纯化，而且该重组蛋白在酵母中进行了糖基有明显的种间交叉保护性，提示用GST-45W重组疫化修饰，稳定性较大肠杆菌表达产物大打提高。用纯苗抗原预防带科绦虫其他相关种侵袭的可能性。Gauei化产物制备的疫苗在两次免疫效力试验中，分别可诱等根据T.ovis45W基因设计引物，从猪带绦虫六钩蚴导猪产生94%和100%的保护。这一研究为猪带绦虫中克隆了45W基因(Ts045W)，发现Ts045W与T

7、045WTSOLl8重组疫苗的大规模生产提供了重要技术支持，以及TSA9非常相似，推测其编码的蛋白可能有作为为其商品化进程注入了强有力的动力。疫苗预防囊虫感染的潜力。按照线粒体基因组的变异，2核酸疫苗的氨基酸序列化学合成多肽GKl和GK2，GKl能诱导对鼠巨颈绦虫40.O%一71，0%的保护。免疫荧光研究显核酸疫苗又名基因疫苗和DNA疫苗，是将外源基示抗GKl抗体可与猪带绦虫虫卵、六钩蚴、囊虫和绦因插人真核表达载体中，构建成重组质粒直接注入动虫发生强烈反应。所以该多肽可作为猪囊尾蚴疫苗候物体内而使动物获得免疫的一种新型疫苗。孙树汉

8、等选抗原。进一步研究证明，GKl至少有一个能刺激CD8用从猪囊尾蚴eDNA表达文库筛选的cCl抗原基因构增殖的T细胞表位，可刺激细胞培养上清产生高水平建了peDNA3一eC1DNA疫苗，用该苗免疫小鼠可诱导的卜干扰素和低水平的IL一4。Huerta