重组il-5作为卵透明带dna避孕疫苗粘膜免疫佐剂的研究

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1、暨南大学硕士学位论文重组IL-5作为卵透明带DNA避孕疫苗粘膜免疫佐剂的研究姓名：何柳媚申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：潘善培20050101独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：何柙8猬签字日期：aov5年朋¨日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解有关保留、

2、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：何衡9编签字日期：舻5年5月¨Et学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：导师签名：繇签字日期0勰◇月U日电话：邮编：垤南人学钡L学位论义莺纽}L--5作为卵透删带DNA避孕疫苗轴膜免疫佐剂的1i)}究摘要为探讨利用自细胞介素5作为佐剂增强粘膜免疫反应，提高卵透明带DNA避孕疫苗的抗生育效能的可行

3、性，本研究首先以含有小鼠自细胞介索5(raiL一5)eDNA的质粒为模板，PCR扩增44’445之间的DNA片段(含信号肽和成熟肽序列)，以质粒pVhXl为载体构建了真核细胞表达质粒pVhXl—mlL一5。通过脂质体转染导入HeLa细胞，并采用间接免疫荧光技术(IIF)检测到了mlL一5在HeLa细胞中的表达。然后，用壳聚糖C390和重组质粒pVAXl—mlL一5制备纳米微粒，经测定壳聚糖对质粒ONA的包裹率达95％以上。用pVAXI-mIL一5和卵透明带避孕疫苗pVAXI-pZP3a壳聚糖纳米微粒口服免疫小鼠。实验小鼠分为三组，每组6只雌鼠。A组单独用卵透明带D

4、NA避孕疫苗pVAXl—pZP3Ⅱ免疫，B组以pVAXl—mlL一5质粒为佐剂，与DNA疫苗共免疫，C组为空白对照组，每组动物接受3次免疫(O、3、6周)。用ELISA法检测小鼠血清及阴道分泌液中抗ZP3IgA抗体反应。结果发现B组全部小鼠血清抗体均呈阳性反应(19OD免疫后／0D免疫前>O．3)，而A组只有两只小鼠血清抗体呈阳性反应，B组小鼠的抗体滴度水平均比A组小鼠高。首次免疫后第10周，实验动物与有生育力的雄鼠合笼，评价其抗生育效能。结果显示，B组小鼠的抗生育率为100％，A组小鼠为50％，C组小鼠为0％。x2检验分析结果表明有统计学差异。其抗生育作用与交配

5、时的抗ZP3IgA抗体滴度有关。首次免疫后第13周，处死动物，对卵巢切片组织病理学观察结果表明，有抗生育效果的小鼠的卵巢组织可观察到各级形态正常的卵泡，无淋巴细胞浸润，与对照组及无抗生育效果的小鼠的卵巢结构无差异。本研究的结果初步表明，利用重组质粒pVAXI—mlL一5与卵透明带DNA疫苗共同免疫小鼠，能增强疫苗诱发粘膜免疫反应的能力，提高卵透明带DNA避孕疫苗的抗生育率，在本研究实验时间范围内没有观察到小鼠的卵巢组织结构发生病理学改变。关键词：卵透明带；DNA疫苗；粘膜免疫：自细胞介素5；佐剂暨南大学碳}。学位论文重组IL--5作为卵透i!I)带DNA避孕疫苗柚

6、膜免疫住彳『lj的研究ABSTRACTInterleukin～5(IL一5)isaTh2typecytokinethatfunctionsasahomodimerandiSsecretedmainlybyT-1ymphocytesandtoalesserextentbymasteellS．IL一5hasbeenshowntobecriticallyinvolvedinthedifferentiationofB-cellsintoantibodysecretingplasmacells。induceantigen～specificIgAantibodyrespons

7、es，andtopromoteeosinophilia．ToinvestigatethefeasibilityofenhancingmucosalimmuneresponseandimprovingantifertilityeffectusingIL一5asadjuvantinzonapellucidaDNAcontraceptivevaccine，themouseinterleukin一5eukaryoticexpressionvectorwasconstructedasadjuvantofcontraceptiveDNAvaccines．ThecDNAcorr

8、espon