壳聚糖卵透明带dna避孕疫苗两种粘膜免疫途径的评价

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1、暨南大学硕士学位论文壳聚糖/卵透明带DNA避孕疫苗两种粘膜免疫途径的评价姓名：董志炜申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：潘善培20050101独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位沦文作者签名：亏讳签字几期：埘年，月j-F_

2、学位论文版权使用

3、授权书本学位论文作者完全了解有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：劣砷签字日期：舸年占月j-自学位淦文作者毕业后去向工作单位：通讯地址：导师签名斟伊0签字日蝴∞萨√月拆电话：邮编：望童苎兰婴±兰竺羔!!L塞塞塑!墅堕望堂旦壁垒壁芏垄堕堕塑堂堕丝壅丝垦竺堡竺摘要目的：评价卵透明带DNA避

4、孕疫苗pVAXl一pZP3a壳聚糖纳米微粒经滴鼻和阴道免疫两种途径诱发的粘膜免疫反应、抗生育作用和对卵巢结构的影响，提高卵透明带DNA避孕疫苗的避孕率，并进‘步探讨用粘膜免疫避免卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的可行性．方法：制备pVAXlpZP3u壳聚糖纳米微粒，分别滴鼻和阴道免疫lO只BALB／c小鼠，对照组免疫不含DNA的壳聚糖，第3周和第6周分别加强免疫一次，ELISA法检测小鼠血清、阴道冲洗液中抗pZP3IgA和lgG抗体；首次免疫后第【O周与有生育力的雄鼠合笼交配，统计怀孕雌鼠动物数；首次免疫后第13周解剖动

5、物取出双侧卵巢，制作石蜡切片，作卵巢组织病理学观察。为检测卵透明带DNA避孕疫苗pZP3Ⅱ抗原在体内的表达，构建重组质粒pEGFP—N1pZP3Ⅱ，与壳聚糖制备成纳米微粒，经鼻粘膜和阴道粘膜免疫小鼠，免疫后第2、4、6、8、lO天解剖动物，取滴鼻免疫小鼠的气管、肺部组织和阴道免疫小鼠的阴道组织制作冰冻切片，直接在荧光显微镜下观察。结果：在滴鼻利阴道免疫小鼠血清和阴道冲洗液中可以检测到抗pZP3aIgA抗体，抗pZP3IgA抗体反应强度与持续时nU有明显的个体差异；滴鼻免疫组8只小鼠(8／10)末怀孕，刚道免疫组5只小鼠(

6、5／7)未怀孕，对照组全部怀孕，抗生育效果与合笼时血清抗pZP3Igh反应强度有关；免疫组末怀孕小鼠与免疫组怀孕小鼠及对照组小鼠的卵巢组织均未观察到病理学变化。小鼠免疫pEGFP-N1一pZP3a壳聚糖纳米微粒后制作的冰冻切片在荧光显微镜下观察显示，与对照组小鼠相比，从免疫后第4天开始在免疫组小鼠气管、肺部、阴道的上皮细胞中呵以观察到比较微弱的绿色荧光，提示以壳聚糖为释放系统经滴鼻和阴道免疫后在这些部位有pZP3n抗原的表达。结论：pVAXlt—pZP3a壳聚糖纳米微粒滴鼻和阴道免疫小鼠能诱发生殖道粘膜免疫反应，产生较好

7、的避孕效果，并对卵巢组织结构没有影响。粘膜免疫是克服卵透明带抗原免疫引起卵巢功能紊乱的一种值得深入研究的途径。关键词：卵透明带；DNA避孕疫苗；粘膜免疫；卵巢功能紊乱；免疫途径；壳聚糖绿色荧光蛋白里塑!燮占堂篁丝兰塞墨塑!塑垄堕生里型垒壁兰壅堕堕壁整堕叁壅堡堡塑堡笪ABSTRACT【AbstractjAim：Toevaluatethemucosalimmuneresponse，antifertilitye圩ectandpathologicalchangeofovarianinducedbyintranasalandvag

8、inalimmunizationwithzonapellucidaDNAcontraceptivevaccine，andexplorethefeasibilityofovercomingovarydysfunction，whichwasoftencausedbyimmunizationofzonapellucidaantigen，andimprovingcontraceptiveefficacybyinducingmucosalimmunityusingchitosan／pVAXl-pZP3ananoparticles．

9、Methods：ChitosardpVAXl一pZP3unanoparticleswaspreparedandadministeredintoeachexperimentalmouseonweeks0,3and6byintranasalandintravaginalrespectively，whereaschitos