共表达霍乱毒素b亚基的dna疫苗的系统及粘膜佐剂活性研究

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1、万方数据论文独创性声明才论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包．含其他人或其它机构已经发表或撰写过的酽究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贞献均已在论文中作了明确的声明并表示丁谢意。作者签名：殛叠垒论文使用授权声明日期?迦塑!，j1本人完全了解复邑大学有关保留、使用等位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅：学校可以公布论又的全部或部赍网容，可以采用影I；F、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此作者签名：祥。导师签名：蛾日期：必万方数据指导小组成员导I)iTi：徐建

2、青张晓燕指导老师：李亮助万方数据目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4Abstract⋯⋯⋯⋯⋯．．i⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯：．⋯⋯⋯⋯．．．，⋯⋯⋯．．：⋯⋯．6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一8第一部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1l1．1引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1l1．2材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯131．3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．191．4讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．241．5结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯322．1引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯322．2材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．342．3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯452．4讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯532．5结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72常见粘膜佐剂概览⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯723万方数据摘要近年来针对HIV的疫苗研究中，包含DNA疫苗的组合应用非常广泛。DNA疫苗的一个固有缺陷就是相对传统的蛋白疫苗以及病毒载

5、体疫苗，其免疫原性较弱。在改造DNA疫苗的免疫原性的策略中，有一种方式就是将具有佐剂作用的活性物质与抗原一同整合于质粒载体中。霍乱毒素是霍乱弧菌产生的一种外毒素，是己知最强的粘膜免疫原，其全毒素以及A、B亚基都具有佐剂活性。在本文中，我们尝试将CTB亚基全长基因和相应抗原融合表达，制成相应的DNA疫苗(以及一些重组痘苗病毒)以及并检测这些疫苗通过系统及粘膜两种不同方式接种后，对于相应部位的各种不同免疫反应的影响。1、共表达抗原与CTB的DNA疫苗在系统免疫中的免疫原性使用的疫苗为本实验室构建的TRIVN、CTB—TRIVN等DNA疫苗[1】，通过肌注免疫的方式，研究其佐

6、剂活性。研究的结果，在T细胞免疫反应和体液免疫两个方面，CTB．TRIVN的反应都显著强于单纯TRIVN。共表达CTB与TRIVN的DNA疫苗在肌注途径具良好佐剂活性。2、融合表达抗原与CTB的DNA疫苗在粘膜免疫中的佐剂活性在初步确定了融合表达抗原与CTB的DNA疫苗在传统的注射型疫苗中的佐剂活性后，进一步考察融合表达抗原与CTB的DNA疫苗的粘膜佐剂活性。研究的结果：无论是在系统(脾细胞)还是在粘膜(近端、远端和肠系膜淋巴结)，通过OVA—CTBrTTV加强的抗原特异性T细胞反应均强于单纯OVA4万方数据f丌V加强。而体液免疫方面则无显著差异。我们还研究了抗原特异性

7、T细胞表面有细胞迁移与归巢相关分子表达状况(c【4p7与CCR9)，在各组之间没有发现显著差异。本论文的主要意图在于通过将CTB直接嵌入载体与抗原共表达的方式提高响应DNA疫苗在系统及粘膜免疫途径中的免疫原性。研究结果表明，CTB共表达的DNA疫苗通过肌注途径免疫可以引发较良好的抗原特异性细胞及体液免疫反应；在粘膜免疫方面，通过DNA疫苗滴鼻初免+相应重组痘病毒肌注加强的策略，新形式的疫苗+佐剂组合可以在系统及粘膜局部引发比较理想的抗原特异性T细胞免疫反应，但是体液免疫反应结果不甚明显。关键词：霍乱毒素B亚基、DNA疫苗、佐剂、粘膜免疫万