蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合柔红霉素对hl60细胞的凋亡作用和survivin mrna表达的影响

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1、蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合柔红霉素对HL60细胞的凋亡作用和SurvivinmRNA表达的影响【摘要】目的：研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bor)单用或联合柔红霉素(DNR)对HL60细胞凋亡和SurvivinmRNA表达的影响。方法：将不同浓度Bor，DNR及两药联合组和对照组作用于HL60细胞，采用MTT法测定细胞增殖活性，RTPCR检测SurvivinmRNA表达。结果：5nmol/LBor作用24h对HL60细胞有增殖抑制作用，并诱导其凋亡。随着浓度增加及其作用时间的延长可使细胞凋亡率明显增加，10nmol/LBor与1.0μmol/LDNR联合作用72h细胞凋亡率最

2、高，与同剂量两药单独作用相比差异有显著性(P＜0.01)。RTPCR检测结果表明：随着药物浓度的增加，SurvivinmRNA的表达逐渐下降，10mmol/LBor与1.0μmol/LDNR联合作用72hSurvivinmRNA表达最低。结论：Bor能显著抑制HL60细胞的增殖并诱导其凋亡，Bor联合DNR对HL60细胞有协同作用，并能显著下调Survivin基因的表达，这可能是促使HL60细胞凋亡的机制之一。【关键词】蛋白酶体抑制剂硼替佐米柔红霉素HL60细胞AbstractObjective：Toinvestigatetheeffectofproteasomeinhib

3、itorbortezomib(Bor)aloneandbinationycin(DNR)onapoptosisofHL60cellsandtheexpressionofSurvivinmRNA.Methods：HL60cellsRNAol/LBorcouldeffectivelyinhibitHL60cellproliferationandinduceditsapoptosisafter24h.HL60cellapoptosisratesignificantlyincreasedeprolongationordoesincrease.Thehighestapoptosisra

4、teresultedin10nmol/LBorbinationol/LDNRafter72h，theexpressionofsurvivinmRNAdecreasedRNAcanbefoundightbeassociatedechanismofHL60cellsapoptosis.Keyeinhibitor；bortezomib；daunomycin；HL60cells急性早幼粒细胞白血病(APL)是一种特殊类型的白血病，硼替佐米(Bor)是一种新型的肿瘤治疗靶向药物。Carter等［1］用RTPCR方法检测18例急性单核细胞白血病(AML)患者的Survivin基因，发现16

5、例患者表现为不同程度的Survivin阳性。Adida等［2］同样发现在急性单核细胞白血病(AML)中Survivin基因高表达的情况。这为进一步揭示Survivin与白血病的关系奠定了基础。本实验用合适浓度Bor、柔红霉素(DNR)及两药联合处理HL60细胞，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞凋亡，RTPCR方法检测Survivin基因的表达，旨在为临床应用Bor联合DNR提供理论依据。1资料与方法1.1试剂与仪器RPMI1640培养液购自Gibco公司，新生胎牛血清为杭州四季青公司产品，βactin和Survivin引物由上海生物工程公司合成。TRIzol试剂、TaqD

6、NA聚合酶、Rnasin、AMV为Fermentas公司产品。MTT为Sigma公司产品，人急性髓细胞白血病细胞株HL60山西医科大学实验中心保存。Bor为美国Millennium公司产品，用无菌注射用水配成1mg/10mL，备用。PNR为浙江海正公司产品，用三蒸水配成10mg/mL，使用时稀释至所需浓度。1.2细胞培养HL60细胞用含10％胎牛血清RPMI1640培养液，在37℃，5％CO2条件下培养，2～3d换液1次，取对数生长期细胞用于实验。1.3研究方案本实验依预实验结果，选择DNR0.5μmol/L(A1组)、1.0μmol/L(A2组)、Bor5nmol/L(B1组)

7、、10nmol/L(B2组)及DNA0.5μmol/L＋Bor5nmol/L为E组，DNR0.5μmol/L＋Bor10nmol/L为F组，DNR0.1nmol/L＋Bor5nmol/L为G组，DNR0.1μmol/L＋Bor10μmol/L为H组，处理24，48，72h，观察药物时间反应，选择药物作用最强的时间段进行Survivin基因检测，以观察两药联合效应。1.4细胞增殖活性MTT检测对数生长期细胞调整密度为1×105/mL，每孔100μL接种，分别