蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合柔红霉素对HL60细胞的凋亡作用和Survivin mRNA表达的影响.doc

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1、蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合柔红霉素对HL60细胞的凋亡作用和SurvivinmRNA表达的影响【摘要】目的：研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bor)单用或联合柔红霉素(DNR)对HL60细胞凋亡和SurvivinmRNA表达的影响。方法：将不同浓度Bor，DNR及两药联合组和对照组作用于HL60细胞，采用MTT法测定细胞增殖活性，RTPCR检测SurvivinmRNA表达。结果：5nmol/LBor作用24h对HL60细胞有增殖抑制作用，并诱导其凋亡。随着浓度增加及其作用时间的延长可使细胞凋亡率明显增加，10nmo

2、l/LBor与1.0μmol/LDNR联合作用72h细胞凋亡率最高，与同剂量两药单独作用相比差异有显著性(P＜0.01)。RTPCR检测结果表明：随着药物浓度的增加，SurvivinmRNA的表达逐渐下降，10mmol/LBor与1.0μmol/LDNR联合作用72hSurvivinmRNA表达最低。结论：Bor能显著抑制HL60细胞的增殖并诱导其凋亡，Bor联合DNR对HL60细胞有协同作用，并能显著下调Survivin基因的表达，这可能是促使HL60细胞凋亡的机制之一。【关键词】蛋白酶体抑制剂硼替佐米柔红霉素

3、HL60细胞AbstractObjective：Toinvestigatetheeffectofproteasomeinhibitorbortezomib(Bor)aloneandcombinationwithdaunomycin(DNR)onapoptosisofHL60cellsandtheexpressionofSurvivinmRNA.Methods：HL60cellsweretreatedwithBor，DNRindifferentconcentrationfor24～72h.Cellproliferat

4、ionwasanalyzedbyMTTassay，theexpressionofsurvivinmRNAwasanalyzedbyRTPCR.Results：5nmol/LBorcouldeffectivelyinhibitHL60cellproliferationandinduceditsapoptosisafter24h.HL60cellapoptosisratesignificantlyincreasedwithtimeprolongationordoesincrease.Thehighestapoptosi

5、srateresultedin10nmol/LBorcombinationwith1.0μmol/LDNRafter72h，theexpressionofsurvivinmRNAdecreasedwiththeagentsconcentrationincreasing.Conclusion：BorcansignificantlyinhibittheproliferationofHL60cellsandinduceapoptosis，synergisticeffectivenessanddowregulatedexp

6、ressionofsurvivinmRNAcanbefoundwhenBorcombinationwithDNR，whichmightbeassociatedwithmechanismofHL60cellsapoptosis.Keywordsproteasomeinhibitor；bortezomib；daunomycin；HL60cells急性早幼粒细胞白血病(APL)是一种特殊类型的白血病，硼替佐米(Bor)是一种新型的肿瘤治疗靶向药物。Carter等［1］用RTPCR方法检测18例急性单核细胞白血病(AML)

7、患者的Survivin基因，发现16例患者表现为不同程度的Surv4ivin阳性。Adida等［2］同样发现在急性单核细胞白血病(AML)中Survivin基因高表达的情况。这为进一步揭示Survivin与白血病的关系奠定了基础。本实验用合适浓度Bor、柔红霉素(DNR)及两药联合处理HL60细胞，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞凋亡，RTPCR方法检测Survivin基因的表达，旨在为临床应用Bor联合DNR提供理论依据。1资料与方法1.1试剂与仪器RPMI1640培养液购自Gibco公司，新生胎牛血清为杭州

8、四季青公司产品，βactin和Survivin引物由上海生物工程公司合成。TRIzol试剂、TaqDNA聚合酶、Rnasin、AMV为Fermentas公司产品。MTT为Sigma公司产品，人急性髓细胞白血病细胞株HL60山西医科大学实验中心保存。Bor为美国Millennium公司产品，用无菌注射用水配成1mg