大豆胰蛋白酶抑制剂对人宫颈癌hela细胞增殖的影响

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1、大豆胰蛋白酶抑制剂对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响【关键词】大豆胰蛋白酶抑制剂人宫颈癌细胞细胞增殖　　Abstract:ObjectiveTostudytheinfluenceofsoybeantrypsininhibitor(Trypsininhibitor.SBTI)onthehumanhelacells'(Ishikaeasuredbyusingmethylthiazolyltetrazolium(MTT)assay.ResultsFor0.20～1.00g/LSBTIconcentration,econcentration,theinhibi

2、tiontocellproliferationicroscope.ConclusionsSBTImarkedlyinhibitedhelacells'proliferationondose-effectandtime-effectrelationship.Keyanhelacells;cellmultiplication宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。患者年龄分布呈双峰状，35～39岁和60～64岁，平均年龄52.5岁。宫颈癌不仅发病率居于首位，近年来发病年龄有提前的趋势，探寻一种经济有效的、非手术的、能够免除平常化疗药物副作用的方法可谓当务之急。大豆

3、胰蛋白酶抑制剂是从大豆中提取的，是指能够抑制胰蛋白酶作用的一类物质。国内外已经有文献报道大豆胰蛋白酶抑制剂具有多种药理活性，其中包括抗炎，抗病毒，抗肿瘤等。现在人们在对结肠癌，前列腺癌，乳腺癌的研究已经证明大豆胰蛋白酶抑制剂有明显的抗肿瘤作用［1-3］。大豆胰蛋白酶抑制剂已经受到人们的关注，成为研究的热点。但是国内外关于大豆胰蛋白酶抑制剂对宫颈癌的研究报道较少。本实验以细胞培养为基础，对大豆胰蛋白酶抑制剂的抗肿瘤作用进行了初步研究，通过证明大豆胰蛋白酶抑制剂对宫颈癌细胞增殖的抑制作用，以期对临床用药和开发提供科学依据，积累实验资料，现报告如下。　　1

4、材料和方法　　1.1实验材料　　1.1.1药品和试剂　　大豆胰蛋白酶抑制剂为北京中医药大学细胞与生化实验室提取（浓度为98%）；RPMI-1640培养基为美国Gibco公司产品，胎牛血清为杭州四季青血清；胰蛋白酶和EDTA均购于Ameresco公司。四甲基偶氮唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）购于Sigma公司；HERAD—6345型二氧化碳培养箱(德国赫利氏公司)；IⅩ71倒置显微镜（日本奥林巴斯公司）;FCANF129004酶标仪(澳大利亚TECAN公司)。　　1.1.2细胞株　　人宫颈癌细胞株（Hela）由北京病毒学研究所惠赠。　　1.1.

5、3培养液　　RPMI1640全培养液（RPMI1640+10％胎牛血清+青链霉素100U/mL及100μg/mL）。　　1.2实验方法　　1.2.1肿瘤细胞培养Hela细胞使用含有10%胎牛血清的RPMI1640全培养液，在设定为37.0℃、5%CO2培养箱中培养。细胞可贴壁生长，待细胞生长贴满底壁的80%左右时传代。传代时移去旧的培养液，用PBS洗涤2次，用含0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA的混合消化液消化，培养液重悬细胞于新培养液中，每瓶传代为2或3瓶。取对数生长期细胞用于实验。　　1.2.2MTT法测定细胞生长将用上述方法培养得到的细胞消

6、化，l000rpm离心10min，计数，以2×105个/L密度接种于96孔培养板中，每孔100μL，在37.0℃、5%CO2培养箱培养24h后，加入浓度分别为0、0.50、1.00、2.50、5.00、10.00g/L的SBTI(溶解在含10%胎牛血清的1640全培养液中)100μL。每一浓度各设6个平行孔，并分别设空白孔(即只加入药液和培养液，不加细胞)以调零。继续培养24、36、48h后，每孔加入20μLMTT(5g/L)，再培养4h，弃上清，每孔加入150μLDMSO，振荡器上震荡10min，应用酶标仪于490nm处测吸光值（A），按照公式：抑

7、制率％=(对照组A－实验组A)/对照A×100％，求抑制率。实验在相同条件下均重复进行3次。　　1.2.3光镜下形态学观察hela细胞接种于50mL培养瓶中，培养24h后，加入0、0.50、1.00、2.50、5.00、10.00g/L的SBTI，培养24h后，光学显微镜下观察细胞形态学变化，并拍摄照片。　　1.2.4统计学处理数据利用SPSS13.0统计软件处理，求抑制率，采用重复测量的方差分析。并绘制出SBTI对Hela细胞抑制作用的量效和时效依赖关系曲线。　　2结果　　2.1SBTI对Hela细胞增殖的抑制作用　　SBTI能够明显的抑制Hela

8、细胞的增殖，并且呈现明显的量效和时效依赖关系。在不同的作用时间分别是24、36、48h，随着药物浓度（为0、