大豆胰蛋白酶抑制剂对人宫颈癌hela细胞增殖的影响

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1、大豆胰蛋白酶抑制剂对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响【摘要】目的探讨大豆胰蛋白酶抑制剂(Soybeantrypsininhibitor,SBTI)对人宫颈癌细胞（hela）体外增殖的影响。方法选用hela细胞进行体外培养，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测SBTI对细胞增殖的影响。结果在药物浓度为0.50～10.00　g/L浓度时，随着药物浓度的增加，随着作用时间的增加，SBTI对细胞增殖的抑制率明显增强；在光镜下可以看到细胞凋亡的特征形态。结论SBTI对hela细胞的增殖有明显的抑制作用，呈现量效，时效关系。【关键词】大豆胰蛋白酶抑制剂人宫颈癌细胞细

2、胞增殖　　Abstract:ObjectiveTostudytheinfluenceofsoybeantrypsininhibitor(Trypsininhibitor.SBTI)onthehumanhelacells'(Ishikawa)proliferationinvitro.MethodsHelacellswereculturedinvitroandeffectsofSBTIoncellproliferationweremeasuredbyusingmethylthiazolyltetrazolium(MTT)assay.ResultsFor0.2

3、0～1.00g/LSBTIconcentration,withtheincreasingconcentrationofthedrugandwiththedurationofthesameconcentration,theinhibitiontocellproliferationwassignificantlystrengthened.Thecharacteristicsoftheapoptosiscanbeobservedunderthelightmicroscope.12ConclusionsSBTImarkedlyinhibitedhelacells

4、'proliferationondose-effectandtime-effectrelationship.Keywords:soybeantrypsininhibitor;thehumanhelacells;cellmultiplication宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。患者年龄分布呈双峰状，35～39岁和60～64岁，平均年龄52.5岁。宫颈癌不仅发病率居于首位，近年来发病年龄有提前的趋势，探寻一种经济有效的、非手术的、能够免除平常化疗药物副作用的方法可谓当务之急。大豆胰蛋白酶抑制剂是从大豆中提取的，是指能够抑制胰蛋白酶作用的一类物质。国内外已经有

5、文献报道大豆胰蛋白酶抑制剂具有多种药理活性，其中包括抗炎，抗病毒，抗肿瘤等。现在人们在对结肠癌，前列腺癌，乳腺癌的研究已经证明大豆胰蛋白酶抑制剂有明显的抗肿瘤作用［1-3］。大豆胰蛋白酶抑制剂已经受到人们的关注，成为研究的热点。但是国内外关于大豆胰蛋白酶抑制剂对宫颈癌的研究报道较少。本实验以细胞培养为基础，对大豆胰蛋白酶抑制剂的抗肿瘤作用进行了初步研究，通过证明大豆胰蛋白酶抑制剂对宫颈癌细胞增殖的抑制作用，以期对临床用药和开发提供科学依据，积累实验资料，现报告如下。　　1材料和方法12　　1.1实验材料　　1.1.1药品和试剂　　大豆胰蛋白酶抑制剂为北京

6、中医药大学细胞与生化实验室提取（浓度为98%）；RPMI-1640培养基为美国Gibco公司产品，胎牛血清为杭州四季青血清；胰蛋白酶和EDTA均购于Ameresco公司。四甲基偶氮唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）购于Sigma公司；HERAD—6345型二氧化碳培养箱(德国赫利氏公司)；IⅩ71倒置显微镜（日本奥林巴斯公司）;FCANF129004酶标仪(澳大利亚TECAN公司)。　　1.1.2细胞株　　人宫颈癌细胞株（Hela）由北京病毒学研究所惠赠。　　1.1.3培养液　　RPMI1640全培养液（RPMI1640+10％胎牛血清+青链霉素10

7、0U/mL及100μg/mL）。　　1.2实验方法12　　1.2.1肿瘤细胞培养Hela细胞使用含有10%胎牛血清的RPMI1640全培养液，在设定为37.0℃、5%CO2培养箱中培养。细胞可贴壁生长，待细胞生长贴满底壁的80%左右时传代。传代时移去旧的培养液，用PBS洗涤2次，用含0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA的混合消化液消化，培养液重悬细胞于新培养液中，每瓶传代为2或3瓶。取对数生长期细胞用于实验。　　1.2.2MTT法测定细胞生长将用上述方法培养得到的细胞消化，l000rpm离心10min，计数，以2×105个/L密度接种于96孔培养板中，

8、每孔100μL，在37.0℃、5%CO2培养箱培养24h后，加入浓度分别为0、0