资源描述：
《爆炸伤创面骨骼肌细胞凋亡的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、爆炸伤创面骨骼肌细胞凋亡的研究【摘要】目的：研究兔肢体爆炸伤创面骨骼肌细胞凋亡、白细胞介素6(IL6)和α肿瘤坏死因子(TNFα)的表达。方法：新西兰大白兔30只,随机分为炸伤后即刻取材组和炸伤创面普通纱布包扎放置1、3、6、12h后取材组(n=6);0.9g铜壳单质猛黑索金炸药(RDX)爆炸装药,海绵间隔4.5cm,绑于左下肢股部中段前外侧,电引爆;分别取爆炸中心区(Ⅰ区)、边缘区(Ⅱ区)、爆震区(Ⅲ区)炸伤肌肉组织,经原位缺口末端标记法作肌肉组织细胞凋亡检测，ELISA法测定肌肉组织的IL6、TNFα含量,并与正常肌肉组织对照研究。结果与结论：爆炸伤后12h内Ⅰ区
2、偶尔或未检测到凋亡细胞,与正常组织间差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅱ区和Ⅲ区肌肉组织在伤后3h出现凋亡细胞,6h达到高峰,与正常组织间差异有显著意义(P<0.01);之后逐渐减少,各检测时间点凋亡细胞数Ⅱ区均高于Ⅲ区,差异有显著意义(P<0.01)。炸伤各区组织IL6、TNFα含量均高于正常组织含量,差异有显著意义(P<0.01);自Ⅰ、Ⅱ区到Ⅲ区,含量依次降低,差异显著(P<0.01)。Ⅱ区和Ⅲ区中IL6含量在伤后3h高表达,6h达高峰,之后逐渐下降,其变化规律与细胞凋亡情况相似;TNFα含量在伤后3h达到高峰,之后逐渐下降。【关键词】
3、爆炸伤;创面;细胞凋亡;白细胞介素6;肿瘤坏死因子α; 兔高爆性武器损伤是一种集破片伤、冲击伤、烧伤多种损伤于一体的复合性损伤，几种致伤因素共同作用使爆炸伤创面呈现复杂的病理变化。现代战争中,肢体爆炸伤占有相当大的比例。为此,制作一种新型的接近实战的兔肢体爆炸伤模型,观察炸伤后创面肌肉组织细胞凋亡的情况,且对炸伤组织中细胞因子白细胞介素6(IL6)和α肿瘤坏死因子(TNFα)作相应测定,以增加对爆炸伤的理性认识。 1材料与方法 1.1实验动物及分组 健康新西兰大白兔30只,体重2.5～3.5kg,雌雄不限。随机分为伤后即刻取材组(n=6)和炸伤创面普通纱布包扎放
4、置1、3、6、12h后取材组(n=6),并与对侧肢体相应部位组织作自身对照研究。 1.2爆炸伤模型制作 实验兔常规肌肉注射安定1mg·kg-1,腹腔注射氯胺酮4mg·kg-1,剪毛备皮、分组实验。两上肢固定于实验台上,左下肢股部中段前外侧绑以0.9g单质猛炸药黑索金(RDX)铜壳小型爆炸装置;炸药与肢体间以4.5cm厚海绵间隔;双下肢不固定,避免爆炸引起兔强烈抽动,造成肢体骨折;腹部及对侧肢体以隔板保护(图1、2);电引爆[1]。图1兔固定于实验台,隔板保护,测量爆炸装药与肢体距离 图2爆炸造成肢体皮肤创面近似圆形,创缘不齐, 创面周围皮肤点状破损及燎毛现象 1.3组织
5、取材与处理 爆炸创面使用精确度0.002mm的游标卡尺测量,创面半径内1/2区域为爆炸中心区(Ⅰ区)，半径外1/2区域为爆炸边缘区(Ⅱ区)，爆炸创面以外与爆炸创面半径的1/2同样宽度为爆震区(Ⅲ区)。各组分别于伤后即刻和伤后1、3、6、12h,自Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区及对侧肢体相应部位切取肌肉组织,1/2标本放置于4%多聚甲醛中固定,以备细胞凋亡检测;其余部分标本用锡纸包裹置于液氮中冷藏,待测定IL6、TNFα。 1.4免疫组化染色 肌组织标本石蜡包埋,连续切片,厚4μm,作末端转移酶标记法(TUNEL)染色。TUNEL试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供,按照试剂盒说明书操作。
6、光镜观察组织切片,细胞核棕褐色者为阳性细胞,即凋亡细胞。选每张阳性切片中凋亡细胞最多的高倍视野5个,计数阳性细胞数,其均值作为平均凋亡细胞数,对视野周边部“压边”的细胞,计左不计右,计上不计下。荧光显微镜观察,细胞核中有荧光颗粒者为凋亡细胞。 1.5创面肌肉组织中IL6和TNFα含量测定 冷藏标本实验室解冻并经蒸馏水洗涤后,置自动匀浆机匀浆,离心机离心取上清液,采用ELISA方法进行检测。IL6和TNFα试剂盒由Biol-1、ng·ml-1。 1.6统计学处理 各组数据用均数加减标准差(x±s)表示,所有数据均用SPSS16.0软件进行统计学分析,成对资料用t检验
7、进行分析,组间比较作方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1大体形态观测 爆炸后30只兔均造成左下侧肢体股外侧开放性伤,伤口大小(3.12±0.45)cm×(3.65±0.52)cm，创面不规则,出血,创面组织撕裂、离断,部分烧灼伤,部分兔发生骨折,30只兔无死亡。 2.2免疫组化法检测组织细胞凋亡 光镜观察,Ⅰ区和正常肌肉组织在伤后12h内偶尔或未检测到凋亡细胞(图3)。与正常肌肉组织相比,Ⅱ区和Ⅲ区组织在伤后3h时检测到凋亡细胞(P<0
