ros、mptp介导肌细胞凋亡在大鼠失神经骨骼肌萎缩中的实验的研究

《ros、mptp介导肌细胞凋亡在大鼠失神经骨骼肌萎缩中的实验的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、山西医科大学硕士学位论文中文摘要目的观察活性氧（ROS）、线粒体通透性转化孔（MPTP）在失神经骨骼肌萎缩后的表达变化及与肌细胞凋亡的相关性,探讨ROS、MPTP参与失神经骨骼肌萎缩的具体分子机制。方法选用30只健康的Vistar大鼠，体重为200～250g，雌雄不限，随机分为对照组（假手术组）、失神经2d组、失神经7d组、失神经14d组、失神经28d组，每组6只。制作坐骨神经切断后失神经支配的腓肠肌Vistar大鼠模型。分别于失神经第2d、7d、14d、28d处死大鼠(脊椎脱臼法)，应用显微外科技术认真游离失神经

2、腓肠肌，并称肌湿重。取腓肠肌标本的1/3立即做骨骼肌单细胞悬液，经DCFH-DA标记后，应用流式细胞术（FCM）检测失神经支配后腓肠肌细胞的ROS的含量；取腓肠肌标本的1/3做冰冻切片，经染色液标记后，激光共聚焦显微镜检测MPTP的开放情况；将剩余1/3的腓肠肌标本做冰冻切片后，脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测肌细胞凋亡。结果大鼠失神经支配后，肌细胞中的ROS、MPTP及凋亡率与正常对照组比较，表达随失神经支配时间的延长（<28天）而持续增加，且各组的表达均显著高于对照组（P<0.05），

3、ROS的表达与MPTP的开放呈正相关（r=0.884，P<0.01）与肌细胞的凋亡率呈正相关（r=0.893,p<0.01），MPTP的开放与肌细胞凋亡率呈正相关（r=0.927,p<0.01）与肌细胞萎缩指标肌湿重比呈负相关（r=-0.907,p<0.01）。结论在Vistar大鼠失神经骨骼肌萎缩的早期，随失神经支配时间的延长，骨骼肌萎缩现象的加重，ROS的含量、MPTP开放率、腓肠肌细胞的凋亡率都是逐渐升高的，且均具有统计学差异。在失神经支配后的骨骼肌萎缩的过程中，ROS、MPTP是细胞凋亡通路的上游调控因子，

4、可能为调控失神经支配后骨骼肌萎缩的重要分子，对肌萎缩的进程起到了促进作用，其具体机制有待进一步深入研究。关键词ROS;MPTP;失神经支配;骨骼肌细胞;凋亡I山西医科大学硕士学位论文AbstractObjectiveTostudytheexpressionofreactiveoxygenspecies(ROS),mitochondrialpermeabilitytransitionpore(MPTP)indenervatedskeletalmuscleatrophyanditscorrelationofcellap

5、optosis,andexplorespecificmolecularmechanismindenervatedskeletalmuscle.MethodsAtotalofthirtyVistaratsthathave200-250weightrandomlydividedintofivegroup:controlgroup(shamoperation),2daysgroup,7daysgroup,14daysgroup,28daysgroup.Standardmodelofdenervatedgastrocnem

6、iusmusclewasestablished.Theratswereexecutedbyvertebraedislocationmethod.Microsurgicaltechniquewasusedtodissociatethedenervatedgastrocnemiusandweightingitswetweight.Theskeletalmuscleofsinglecellsuspensionimmediatelydidby1/3denervatedgastrocnemiusmusclesamples.A

7、fterlabeledbyDCFH-DA,ThecontentofROSinthegastrocnemiusweredetectedbyflowcytometry(FCM).Denervatedgastrocnemiusmusclesamplesweretaken1/3todofrozensectionandlabeledbydye.Themitochondrialpermeabilitytransitionporeinthegastrocnemiusweredetectedbyfluorescencemicros

8、cope;Aftertheremaining1/3ofdenervatedgastrocnemiusmusclesamplesdidthefrozensection,theapoptoticcellsinatrophicmuscleweredetectedbyTUNEL.ResultsComparedwiththecontrolgroupafterdener