“损伤血瘀证”大鼠骨骼肌细胞凋亡和坏死性凋亡的关系及机制的研究

“损伤血瘀证”大鼠骨骼肌细胞凋亡和坏死性凋亡的关系及机制的研究

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1、成都中医药大学博士学位论文成都中医药大学(基础医学院)二0一八届博士研究生学位论文“损伤血瘀证”大鼠骨骼肌细胞凋亡和坏死性凋亡的关系及机制的研究Studyontherelationshipandmechanismofapoptosisandnecroticapoptosisonratskeletalmusclecellsof“injurybloodstasissyndrome”研究生姓名:杨露寒指导教师:蓝肇熙教授学科专业:中医诊断学二○一八年五月1成都中医药大学博士学位论文学位论文“损伤血瘀证”大鼠骨骼肌细胞凋亡和坏死性凋亡的关系及机制Studyon

2、therelationshipandmechanismofapoptosisandnecroticapoptosisonratskeletalmusclecellsof“injurybloodstasissyndrome”杨露寒指导教师姓名:蓝肇熙教授申请学位级别:博士学位专业名称:中医诊断学论文提交时间:2018.05.23论文答辩时间:2018.05.24二○一八年五月2成都中医药大学博士学位论文中文摘要目的:本课题通过对“损伤血瘀证”大鼠骨骼肌细胞凋亡的情况及Caspase3、Caspase8、DRP1、FADD、RIP1、RIP3浓度变化的观察

3、,初探“损伤血瘀证”的病理过程的微观变化,证明“损伤血瘀证”的本质是凋亡而不是坏死,以及“损伤血瘀证”的凋亡途径可能是坏死性凋亡与生理性凋亡同时存在的,并且这种相互的竞争关系是损伤破坏和损伤修复的过程。方法:[1]1.造模方法:用“定量化重力击打法”对大鼠进行“损伤血瘀证”的造模。2.分组:Wistar大鼠80只,按随机数字表分为8组。A组(空白对照),B组(造模后1小时),C组(造模后12小时),D组(造模后24小时),E组(造模后72小时),F组(造模后120小时),G组(造模后168小时),H组(造模后336小时)。3.观察指标:用Tunel法和

4、Elisa法,检测A组(空白对照),B组(造模后1小时),C组(造模后12小时),D组(造模后24小时),E组(造模后72小时),F组(造模后120小时),G组(造模后168小时),H组(造模后336小时)骨骼肌细胞凋亡情况以及Caspase3、Caspase8、DRP1、FADD、RIP1、RIP3的浓度变化情况。4.统计学方法:采用GraphPadPrism6软件作图分析,实验数据均用SPSS19.0软件分析。实验结果以平均数±标准差表示。组间的两两比较采用单因素方差分析(One-WayANOVA),方差齐性用LSD检验,方差不齐用Tamhane’

5、sT2检验。3成都中医药大学博士学位论文结果:1.用Tunel法观察骨骼肌的凋亡情况:B组(造模后1小时)和C组(造模后12小时)与空白组比较均未发生显著变化(P>0.05);造模后24小时,凋亡上升并发生显著变化(P<0.05);在24小时到120小时,凋亡发生的变化速度较缓慢(P<0.05);120-168小时,凋亡指数上升并有了显著的改变(P<0.05);168小时以后,凋亡指数缓慢下降,但差异性不显著(P>0.05)。2.Elisa法检测骨骼肌凋亡情况:(1)Caspase3组间两两对比具有统计学差异(P<0.05)的组有:A组(空白组)与B、

6、C、D、E、F、G、H组(造模组),C组与E组、D组与E组、E组和F组、E组和G组。造模成功后,Caspase3的数值出现速度较快的上升达到最高点(P<0.05)后开始下降,72小时及120小时下降较为明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)Caspase8组间两两对比具有统计学差异(P<0.05)的组有:A组(空白组)与B、C、D、E、F、G、H组(造模组),D组与E组、E组与G组、F组和G组。造模成功后,Caspase8的数值出现速度较快的下降至最低点(24小时),之后缓慢上升(72小时)后下降(168小时),变化具有显著差异性(P<0.0

7、5)。(3)DRP1组间两两对比具有统计学差异(P<0.05)的有:A组(空白组)与B、C、D、E、F、G、H组(造模组)、C组与D组比较、D组与E组。造模成功后,DRP1的数值出现速度较快的下降最低点(1小时),然后缓慢上升(24小时)再缓慢下降(72小时),变化具有显著差异性(P<0.05)。(4)FADD组间两两对比具有统计学差异(P<0.05)的有:A组(空白组)与B、C、D、E、F、G、H组(造模组),B组与G、H组,C组与E、G、H组,D组和E、G、H组,E组与F、G、H组。造模成功后,FADD的数值缓慢上升到最高点(72小时)后缓慢下降(

8、120小时),变化具有显著差异性(P<0.05)。(5)RIP1组间两两对比具有统计学差异(P

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