气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞bcl2及bax相关凋亡因子的表达

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1、气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞bcl2及bax相关凋亡因子的表达【摘要】目的观察气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞的凋亡及bcl2、bax相关凋亡因子的表达。方法采用饥饿、疲劳、寒冷、惊吓等综合因素方法复制气虚血瘀证大鼠模型，观察大鼠胸主动脉血管内膜形态学，检测血管平滑肌细胞的凋亡指数及bcl2、bax蛋白的表达。结果气虚血瘀大鼠血管内膜明显增殖，血管平滑肌细胞bcl2蛋白表达增高(96.15±0.02vs21.13±0.05);bax蛋白表达降低(1.05±0.12vs68.06±0.06);bcl2/

2、bax增高(2.92±0.67vs0.01±0.01)(P<0.05)。结论气虚血瘀证大鼠存在血管平滑肌细胞增殖和凋亡严重失调等病理生理基础。【关键词】气虚血瘀证;血管平滑肌细胞;细胞凋亡　　【Abstract】ObjectiveToobservetheapoptosisandtheexpressionofofbcl2andbaxinthevascularsmoothmusclecellsofratse.MethodsTheratsmodeleorphologyofthethoracicaortai

3、ntimaoothmusclecellseasured.ResultsThethoracicaortaintimaapparentlyproliferatedinmodelgroup(P<0.05),thelevelofprotEInbcl2inthevascularsmoothmusclecellsoothmusclecellsalcontrolgroup(1.05±0.12vs68.06±0.06,P<0.05).Theratioofbcl2andbaxoothmusclecellspr

4、oliferationandapoptosisinratse.　　【Keye;Vascularsmoothmusclecells;Apoptosis　气虚血瘀趋向是现代人群一个突出的体质病理学特征〔1〕,气虚血瘀证是临床多个学科、多种疾病常见中医证候之一，尤其在心脑血管疾病等老年慢性疾病中更为常见。老年冠心病的病机关键是气虚血瘀，而主要病理变化在内皮功能失调(ED)〔2〕,ED同时也是动脉粥样硬化(AS)的启动步骤〔3〕。因此保护血管内皮细胞(VEC)，防治AS是防治心脑血管疾病的关键措施。本实验选用老龄大

5、鼠，采用饥饿、疲劳、寒冷、惊吓等综合因素方法复制气虚血瘀证模型〔4～6〕，首次观察气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞的凋亡及bcl2、bax相关凋亡因子的表达，从细胞凋亡分子生物学角度探讨气虚血瘀的病理生理基础，为临床治疗心脑血疾管病等老年慢性疾病提供实验依据。　　1材料与方法　　1.1动物SD大鼠24只，18月龄，雌雄各半(体重600～800g)，由重庆医科大学动物实验中心提供，生产许可证号：SCXK(渝)20070001。　　1.2主要仪器及试剂DGB/20002A台式干燥箱(重庆实验设备厂)，Ha公司

6、)。　　1.3方法　　1.3.1造模空白对照组、造模组各12只，实验大鼠采用饥饿、疲劳、寒冷、惊恐刺激及高脂饮食4l/kg加入实验大鼠饮水中。观察大鼠的体重、精神、舌质等，检测血流变学，其中模型组大鼠死亡2只。　　1.3.2标本采集及检测耐疲劳时间：以游泳大鼠第一次自然下沉为度，测出开始游泳到捞出水面所用的时间。双球直管式检测。造模4in较空白对照组(8.89±2.09)min明显缩短(P<0.05);各项血液流变学指标较正常大鼠明显增高(P<0.01，P<0.05)，见表1。　　2.2大

7、鼠血管平滑肌细胞凋亡及bcl2和bax表达模型组大鼠血管平滑肌细胞凋亡指数(3.19±0.03)%较空白对照组(90.75±0.01)%明显下降，差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠bcl2蛋白表达阳性率较空白对照组明显增高，bax蛋白表达阳性率明显降低，bcl2/bax比值明显增高(P<0.05)，见表2。　　2.3大鼠血管平滑肌细胞形态学改变光镜下观察，空白对照组大鼠血管中膜平滑肌走行清晰，无增生，弹力纤维未见异常，无增厚。模型组大鼠血管内膜增厚，平滑肌与弹力纤维粗大，层数增多

8、，排列致密.中膜向内膜过度增殖。见图1。电镜下观察，空白对照组VSMC可见具有凋亡特征的染色质边集。模型组VSMC核浆比例明显增大，细胞器不丰富，主要为幼稚血管平滑肌细胞。见图1。表1空白对照组与模型组大鼠血液流变学指标表2各组大鼠血管平滑肌细胞bcl2和bax表达　　3讨论　　中医认为，气为血帅，气行则血行，气虚则血瘀。本实验根据中医老年人气虚体质学说及“饥则损气”、“劳则耗气”、“湿伤脾、寒伤肾”、“忧思伤