左归丸对大鼠胸腺细胞凋亡及bcl-2，bax表达的影响

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1、左归丸对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2，Bax表达的影响作者：龚张斌徐品初金国琴【摘要】目的观察左归丸干预皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响。方法1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞。实验分为正常对照组，模型组，左归组。AnnexinV-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡情况;RealtimePCR和Western印迹法检测Bcl-2、Bax的表达变化。结果胸腺细胞经皮质酮处理后，胸腺细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bcl-2mRNA表达显著降低;Bax表达显著升高(P<0.

2、01)，Bcl-2/Bax比值降低(P<0.01)。与模型组比较，左归组胸腺细胞凋亡率降低(P<0.01);BaxmRNA表达降低，Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。结论左归丸鼠血清能通过调节bcl-2/bax比率的异常变化，抑制胸腺细胞过度凋亡。【关键词】胸腺细胞;左归丸;凋亡;Bcl-2;Bax　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheaccommodationandthemolecularmechanismofZuoguiPill(ZGP)ontheapopt

3、osisofratthymocytesinducedbycorticosterone.MethodsTheZGPcontainedratserumwereprepared.Thymocytesweredividedintocontrol,model,ZGPgroups.Theeffectofapoptosiswasmeasuredby16AnnexinV-FITC/PIdoublestainingandFCM.TheexpressionsofBcl　　-2,Baxweremeasuredbyreal-timePCRandW

4、esternblot.Results10-5mol/LCorticosteroneinducedapoptosisofthymocytes，up-regulatedtheexpressionofBax.TheratioofBcl-2/Baxwasdescended.Comparingwithmodelgroup,ZGPgroupshowedlowerexpressionofBax(P<0.05),theratioofBcl-2/Baxwaselevated.Thenumberofapoptosiscellswered

5、ecreased(P<0.05).ConclusionsZGPcontainedratserumcaninhibittheapoptosisofthymocytesinducedbycorticosterone.ThepossiblemechanismistoregulatetheratioofBcl-2/Bax.　　【Keywords】Thymocyte;ZuoguiPill;Apoptosis;Bcl-2;Bax　　免疫系统功能在衰老过程中发生进行性的下降或紊乱，表现为胸腺细胞过度凋亡，胸腺萎缩〔1〕，进而影响细

6、胞免疫功能。左归丸方取“阳中求阴”之义，阴阳并调，具有滋阴补肾，填精益髓的功效，为治疗肾虚衰老的经典方。本课题组前期研究发现左归丸能延缓老年大鼠胸腺依赖性免疫功能〔2〕，但详细机制未明。因此本实验以衰老肾虚学说为理论依据，以阴阳平衡理论为指导，以平补肾之阴阳改善衰老机体免疫系统为立法准则，在既往整体实验基础上，模拟老年大鼠体内高皮质酮血症，制作皮质酮致胸腺细胞凋亡模型，探讨左归丸抑制胸腺细胞凋亡的分子机制。16　　1材料与方法　　1.1材料1.1.1实验动物清洁级出生24hSD乳鼠;清洁级成年SD大鼠，雄性，体重150～1

7、70g。上海中医药大学实验动物中心提供〔SCXK(沪)2008-0016〕。　　1.1.2主要药物和试剂左归丸：熟地24g、山药12g、枸杞12g、山茱萸12g、川牛膝9g、菟丝子12g、鹿角胶12g、龟胶12g，购自上海康桥药业有限公司。除鹿角胶、龟胶外，按原方比例水煎2次，浓缩，将鹿角胶、龟胶烊化，混合此三种药液，浓缩成膏，浓度2.92g生药/g煎膏，-30℃保存。皮质酮(Corticosterone)购自USBiological公司，以二甲基亚砜(DMSO)配制成储液，-20℃冰箱保存，试验时用RPMI-1640培养

8、基稀释(DMSO终浓度<0.5%);兔抗大鼠Bcl-2单克隆抗体、兔抗大鼠Bax单克隆抗体购自SantaCruz公司;小鼠抗大鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酸(GAPDH)单克隆抗体购自CellSignaling公司;Real-timePCR引物由上海生工生物科技有限公司合成。　　1.1.3主要仪器　Re