白介素1β和小胶质细胞在帕金森病中的作用

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1、白介素1β和小胶质细胞在帕金森病中的作用：李淑娟胡国华过红明张小林于明董丽华【摘要】目的探讨白介素1β(IL1β)和小胶质细胞在帕金森病(PD)发病机制中的作用，阐述小胶质细胞激活后作用的可能合理模式。方法采用立体定向术将嗜神经毒素6羟基多巴（6OHDA）注入大鼠右侧纹状体制作偏侧PD大鼠模型。造模2个月后，计数黑质致密部神经元和小胶质细胞数目，采用免疫组织化学方法观察黑质致密部IL1β表达水平的变化。结果光镜下观察模型组右侧黑质致密部多巴胺能神经元几乎消失,小胶质细胞数目明显增多,与假手术组和正常对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。免疫

2、组化染色显示模型组右侧黑质致密部可见明显的小胶质细胞核周有IL1β的表达，呈棕褐色；而模型组左侧黑质、假手术组和正常对照组右侧黑质未见明显的IL1β的表达。结论嗜神经毒素6OHDA可导致神经元释放小胶质细胞激活态物质，激活的小胶质细胞释放IL1β介导细胞毒性作用促进神经元的慢性变性坏死。【关键词】6羟基多巴（6OHDA）；帕金森病（PD）；黑质；白细胞介素1β【Abstract】ObjectiveToexploretherolesofinterleukin(IL)1βandmicrogliainthepathogenesisofParkinso

3、n′sdisease.MethodsThe6hydroxydopamine(OHDA)ofratsattodel.Aftertonths,thenumberofmicrogliaandthedopaminergicneuronseasuredbyimmunohistochemicalstainingunderopticalmicroscope.ResultsThenumberofthedopaminergicneuronsintherightsubstantianigrapactaofPDmodelgroupberofmicrogliaandcontrolg

4、roups(P＜0.05).IL1βicrogliaintherightsubstantianigrapactaofPDmodelgroup.,controlgroups.Conclusions6OHDAcaninfluencethestateofactivationofmicroglia,theactivatedmicrogliamaypromotetheneuronschronicdegeneracyandnecrosisbyreleasingIL1βmediatedcytotoxiceffect.【Keyine;Parkinson′sdisease

5、;Substantianigra;Interleukin1β帕金森病（PD）的病因及发病机制尚未完全明了。近来研究表明脑内炎症反应包括多种细胞因子的产生和释放及小胶质细胞的激活可能参与PD的发病。本实验采用纹状体双靶点注射神经毒素6羟基多巴（6OHDA）制作PD大鼠模型，观察小胶质细胞数量改变和白介素(IL)1β在黑质致密部的表达变化，从而探讨免疫细胞因子和小胶质细胞在PD发病机制中的作用。1材料与方法1.1实验动物及分组雄性健康g/kg体重腹腔注射麻醉后，将大鼠固定于立体定向仪上。暴露前后囟,参照大鼠脑立体定位图谱定位，钻孔。用微量注射器在以下两点处

6、各注入10μg/5μl含0.2%抗坏血酸的6OHDA(Sigma公司，美国)盐溶液5μl。第1点：前囟前0.7mm，中线右侧3.0mm，硬膜下4.5mm；第2点：前囟后0.2mm，中线右侧2.6mm，硬膜下6.0mm。注药速度为0.5μl/min，留针5min后以1mm/min速度退针，骨蜡填塞颅骨孔，缝合皮肤。置笼喂养，每天经腹腔给予20万U青霉素共7d以预防感染。假手术组以生理盐水代替6OHDA盐溶液，其余步骤同模型制作组。1.2.2阿朴吗啡诱发旋转手术后1a公司，美国)0.5mg/kg，每周1次，直至2个月。若每次大鼠均恒定地转向左侧，平均＞7转/m

7、in视为成功模型。1.3标本的选取及免疫组织化学染色1.3.1标本的选取10%水合氯醛麻醉后，心腔内先后灌注生理盐水和4%多聚甲醛内固定，断头取脑，标本于10%中性福尔马林溶液中固定7d，石蜡包埋，切片，片厚为4μm。标本取自前囟前0.6mm,前囱后0.2mm层面及前囱后4.8～5.4mm层面之间不同部位，计数黑质致密部多巴胺能神经元和小胶质细胞数目。1.3.2IL1β免疫组化染色链霉素抗生物素蛋白过氧化酶法染色，4μm石蜡切片脱蜡至水，入0.01mmol/LpH6.0柠檬酸盐缓冲液,加热至98℃抗原修复，H2O2甲醇阻断，室温孵育；羊血清封闭，室温孵育；

8、加入特异性IL1β一抗(稀释度为1∶