激活的星形胶质细胞分泌的TNFα在癫痫发病中的作用

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1、华中科技大学硕士学位论文激活的星形胶质细胞分泌的TNF-α在癫痫发病中的作用姓名：彭俊忠申请学位级别：硕士专业：人体解剖学指导教师：朱家祥2003.4.1华中科技大学同济医学院硕士学位论文激活的景形胶质细胞分泌的TNF．ft．在囊瘸发病中的作用硕士研究生彭俊忠导师：朱家祥教授华中科技大学同济医学院解剖学系武汉430030中文擅要／癫痫是一种严重危害人体健康的常见病和多发病。在其发生发展过程中，除了神经元的明显病理改变外，还伴随着显著的星形胶质细胞形态和功能的异常。我们研究室以往的研究证明，TNF．n不仅可以明显激活培养的星形胶质细胞，还可以促进其释放TNF．a、NO、G

2、lu等神经活性物质，我们推测激活的星形胶质细胞可能通过其释放的神经活性物质改变了神经元的兴奋性，从而引起癫痫的发作。为了、证实这一设想，／我们应用两种不同条件刺激下的星形胶质细胞条件培，养液注入大鼠侧脑室，观察它对动物行为及脑电图的影响，并运用免疫细胞化学方法观察生长抑素(somatostatin，SS)、Y氨基丁酸(gamma．aminobutyricacid，GABA)及离子型谷氨酸受体NMDARl(N．methyl．D．aspartatereceptor)的表达情况，以期为激活的星形胶质细胞在癫痫发病中的作用提供一些在体实验依据。，l首先，我们选用肿瘤坏死因子TN

3、F-a(tBmornecrosisfactor．a。TNF．a)刺激纯化培养的海马星形胶质细胞，将此条件培养液(As仃ocyticConditionedMedium，ACM)lOpl注入正常大鼠侧脑室，观察动物行为与脑电图的变化；同时，用免疫细胞化学染色检测大脑皮质与海马中SS、GABA与NMDARl表达水平的改变。结果：①侧华中科技大学同济医学院硕士学位论文脑室注射ACM可引起大鼠nl级癫痫样发作及典型的尖波、棘波、棘·慢波癫痫样脑电图表现；②免疫细胞化学染色结果表明：注射ACM后1h可观察到大鼠大脑前梨状皮质和海马ss及NMDARl免疫反应阳性神经元数和平均光密度值

4、均高于对照组，2．4h达最高，至8h恢复至对照组水平；注射ACM后lh可观察到大鼠大脑前梨状皮质和海马齿状回GABA免疫反应阳性神经元数和平均光密度值均低于对照组，2．4h达最低。至8h恢复至对照组水平。本实验结果表明：1．TNF．a激活的星形胶质细胞可诱导大鼠癫痫发作。2．SS、GABA及NMDA表达的变化可能与癫痫发作有关。为了进一步探讨星形胶质细胞分泌的TNF．a在癫痫发病中的作用，我们将TNF．n反义寡核苷酸探针作用于分离纯化的星形胶质细胞后16．18h，再用马桑内酯(CoriariaLactone，CL)刺激2h，更换培养基继续培养，再分时段提取培养液。然后，

5、我们将上述培养基提取液注入正常SD大鼠侧脑室，观察动物行为的变化；并用免疫细胞化学染色检测大脑皮质与海马中SS、GABA与NMDARl表达水平的改变。结果：①侧脑室注射此培养液后，大鼠无癫痫样行为发生：②免疫细胞化学染色结果表明：大鼠大脑前梨状皮质和海马SS、GABA及NMDARl免疫反应阳性神经元数和平均光密度值与对照组无显著性差异。本实验结果表明：TNF-a反义寡核苷酸阻断后CL刺激的星形胶质细胞条件培养液不能诱导大鼠癫痫发作，星形胶质细胞在癫痫发、／病中的作用可能主要是由TNF-n来介导的。／√综上所述，TNF．n是一种多源性、多效性的细胞因子，在中枢神经系统内，

6、星形胶质细胞既是其主要来源，也是其作用的重要靶细胞。星形胶质细胞在TNF．a作用下，激活并释放一些重要的神经活性物质，如TNF．n、NO、Olu等，它们作用于不问的神经元，使其华中科技大学同济医学院硕士学位论文ss及NMDARI的表达增高，同时GABA的表达降低。这样导致神经元的兴奋和抑制的失衡，从而导致癫痫的发作。关键词星形胶质细胞癫痫．TNF-a，SS／GABANMDARllII华中科技大学同济医学院硕士学位论文TheRoleofTNF-aproducedbyActivatedAstrocytesinEpileptogenesisMasteralCandidateP

7、engjunzhongTutorzhnjiaxiangProf．DepartmentofAnatomy,TongiiMeScalcollegeofHuaZhonguniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030ABsTRACTEpilepsyisacommondiseasethatseriouslythreatensthehumanbeings．Duringitsgenesisanddevelopment，thereareapparentabnormalityofastrocytesinmorpho