胶质细胞在创伤性癫痫发病机制中作用的研究

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1、平中科技大毋阅涛百母此SM-M居博士李位裕友胶质细胞在创伤性癫痛发病机制中作用的研究博士研究生姚源蓉博士生导师童尊塘孙圣刚教授专晰55?一___摘要一I'lA铁离子杏仁体注射制备创伤性癫痈大鼠模型，探讨海马组织星形胶质细胞增生、突触重建和氨基酸神经递质的代谢和转运在创伤性癫痛发病机制中的作用，以及在创伤性癫痛发生发展过程中，星形胶质细胞增生与突触可塑性及神经递质转运之间的相互关系和影响。从而阐明胶质细胞增生在创伤性癫痈发病机理中的重要作用，为更好地预防和治疗脑创伤后继发性癫痈提供可靠的分子及形态

2、学病理基础。︸/‘、I方法I动物随机分为对照组、铁离子组和铁离子+70一轻基胆固醇(70-hydroxycholesterol,70OHCH)组。应用氯化铁(FeC13)杏仁体注射制作创伤性癫痈模型，铁离子+713OHCH组在注入FeCI,后，静脉注射含有对星形胶质细胞增生有明显抑制作用的70-OHCH的脂质包被微泡，连续用药2d。观察大鼠行为学表现，并作脑电图动态记录。应用免疫组织化学染色和Westernblot检测胶质纤维酸性蛋白(Glialfibrillaryacidicprotein,G

3、FAP)和突触囊泡蛋白一一突触素(Synaptophysin,p38)在海马各区的动态表达。透视电镜观察海马组织的超微结构改变，激光扫描共聚焦显微镜和免疫双标方法对谷氨酸和y一氨基丁酸在海马各亚区的分布及谷氨酸能和丫一氨基丁酸能突触在总突触中的比例的变化进行研究。采用RT-PCR方法检测谷氨酸转运体GLAST,GLT1和EAAC1mRNA在海马的动态表达。[结果I铁离子组癫痈模型成功率约为90，潜伏期为6-7d,卑中科技大毋月济医李览rocs汤博士母位伦义铁离子+713-OHCH组83%大鼠发展

4、成慢性自发性抽搐，潜伏期为9-10d。两组均记录到与抽搐发作一致的棘波、棘慢波综合和尖波，从杏仁体扩散到双侧海马和皮质。铁离子组和铁离子十70-OHCH组注射侧海马锥体细胞大量坏死和凋亡，铁离子组双侧海马星形胶质细胞大量增生，星形胶质细胞面密度较对照组明显增加，70-OHCH使增生的星形胶质细胞减少了50%-70%。铁离子组双侧海马齿状回分子层内带p38反应产物比对照组显著增加，铁离子十7p-OHCH组双侧海马齿状回分子层内带p38反应产物比铁离子组增加更明显。铁离子组和铁离子十70-OHCH组

5、海马各亚区Glu每像素的荧光强度比对照组明显增强，CAI和CA3区Glu能突触在总突触中的比例增多。铁离子组注射侧CAI,CA3区和齿状回GABA每像素的荧光强度比对照组明显减弱，而对侧齿状回明显增强，铁离子+70-OHCH组注射侧海马CAI和CA3区GABA每像素的荧光强度比对照组明显减弱，双侧齿状回GABA每像素的荧光强度比铁离子组明显增强。铁离子组注射侧齿状回GABA能突触比例比对照组减少，铁离子+70-OHCH组注射侧齿状回GABA能突触比例没有明显改变。铁离子组和铁离子+70-OHCH

6、组双侧海马GLTI、GLAST和EAAC1mRNA的表达在损伤后3d都显著降低。7d时，铁离子组GLAST,GLT1mRNA表达上调达顶峰，随后又降低，GLASTmRNA降至基线水平以下。EAAC1mRNA表达7d后持续增高，维持在较高水平。铁离子+70-OHCH组7d后双侧海马三种转运体表达均比铁离子组增高。【结论】FeC13杏仁体注射可成功诱发创伤性癫痈模型，模型成功率高。FeC13继发引起的海马组织的神经元脱失、反应性胶质细胞增生及异常的神经元放电环路，是形成慢性自发性癫痛的病理学基础，兴

7、奋性神经递质与抑制性神经递质之间作用失衡、Glu转运体GLTI平中科谈大毋门济成母陇PMS石博士毋‘恰文和GLAST的下调是促使癫痈发生发展的重要分子学机制。星形胶质细胞增生在创伤性癫痛发病机制中起重要作用，抑制胶质细胞增生，可影响海马突触可塑性，有利于调整海马内兴奋性和抑制性功能系统之间作用的失衡，可延长损伤与发生慢性自发性抽搐之间的间歇期，在一定程度上降低创伤性癫痈的发病率。但创伤性癫痛发病机制很复杂，是多种因素综合作用造成的，单一控制某一因素并不能完全控制癫痈的发生和发展。介一、严-【关键

8、词】创伤性癫痈;胶质细胞增生;突触;谷氨酸;丫一氨基丁酸;谷氨酸转运体;赶圣燮缪;竺呈平中科玻大甘阅济医母优欲”，几博士考俄恰久Studyoftheroleofglialcellsinpost-traumaticepileptogenesisPh.Dcandidate:YuanrongYaoSupervisorsEtangTongProfShenggangSunAbstractIObjective]Topreparepost-traumaticepilepsyratmodelbyanamygda