sle 相关基因 ifit1 免疫调节功能的初步研究

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1、SLE相关基因IFIT1免疫调节功能的初步研究【关键词】系统性红斑狼疮；IFIT1；细胞因子；基因干预〔Abstract〕ObjectiveTostudythefunctionofIFIT1,anovelgeneassociatediclupuserythematosus(SLE).MethodsFirstanexpressioncloneofIFIT1inganLRrebinationreactionbetGenecopoieaandaGateitingdilutionmethod.Thestabletransfe

2、ctantsofEGFPandIFIT1-EGFPulatedetry.Theapoptosisandexpansionofeachtransfectantanufacture'sinstruction.TheculturesupematantsoretransfectionofgenesilencevectorallRNAduplexespartiallyblockedtheexpressionofoverexpressedIFIT1inJurkatTcel1.Thesameassaysulationolecule

3、s,apoptosisandexpansionamongJurkat,Jurkat/EGFP,andJurkat/IFIT1-EGFPtransfectants.ButitayplayanimportantroleintheproductionofcytokinesandmayinterfereintheTh1/Th2balance.〔Key24594），按照网页上的要求设计靶序列特异的RNAi（选择IFIT1的mRNA起始编码下游4个位点195、653、1004及1241，每个位点长度为19个碱基，共8条序列），经

4、Blasr验证后由深圳匹基公司合成。制备基因沉默的表达质粒按照产品操作说明书进行，经筛选扩增纯化。G418筛选多克隆，再将4种基因沉没质粒分别转染过表达细胞株，用荧光显微镜及定量PCR检测IFIT1-EGFP的表达，挑选出下调幅度最大的（>70%）沉默质粒进一步扩增。1.4.2下调IFIT1的mRNA后观察细胞因子的分泌水平变化扩增培养Jurkat/1FIT1-EGFP细胞株，每2L沉默质粒转染2×l06个细胞，48h后，用CD3（1g/mL）和CD28（2g/mL）刺激细胞株，3d后检测细胞因子的分泌水平，同

5、时以空白沉默质粒转染的Jurkat/IFIT1-EGFP细胞株为对照。1.5统计学处理所有资料均以均数±标准差（x±s）表示；差异的显著性检验采用t检验进行分析；P<0.05作为显著性界限。2.2细胞膜分子的表达使用平均荧光强度（MFI）来表示细胞膜分子的表达水平。经流式细胞仪检测，3个细胞株（Jurkat、Jurkat/EGFP和Jurkat/IFIT1-EGFP）之间，细胞膜分子的表达水平无显著性差异（表2）。2.3CD3和CD28刺激后细胞因子水平3个细胞株用CD3（1mg/L）和CD28（2mg/L）刺

6、激3d后，检测细胞因子的分泌水平，数据显示Jurkat/IFIT1-EGFP细胞株的细胞因子IL4及IL-10的产量明显高于其它2个细胞株，而IL-2和IFN-γ在3个细胞株间的变化并不明显（表3）。2.4地塞米松诱导的细胞凋亡3个细胞株（Jurkat、Jurkat/EGFP和Jurkat/IFITl-EGFP）流式细胞仪检测，凋亡细胞百分比分别为8.75%、5.02%、6.13%，差异无显著性（P>0.05）。2.5流式细胞仪检测细胞增生水平在加核酸染料CSFE后，经CD3（1mg/L）和CD28（2mg/L

7、）刺激4d后，用流式细胞仪检测细胞增生程度,结果表明IFIT1对细胞的增生无明显影响。2.6Jurkat/IFIT1-EGFP细胞株下调IFIT1-mRNA后细胞因子表达的变化在下调IFIT1的mRNA后，Jurkat/IFIT1-EGFP细胞株分泌IL-4和IL-10的能力相应下降，与未下调mRNA者相比差异有显著性意义（表4）。3讨论系统性红斑狼疮（SLE）是由遗传、性激素、感染、环境等因素相互作用引起机体免疫调节紊乱所致的一种自身免疫性疾病。由于细胞和体液免疫功能障碍，产生多种自身抗体，触发机体的免疫病理反应，

8、血清中出现以抗核抗体为代表的多种自身抗体，最终导致多系统多器官功能受损。大量研究[3-6]证实，免疫调节障碍在SLE中表现突出，大量自身抗体产生和丙种球蛋白升高，说明B细胞活动高度活跃；T淋巴细胞绝对量虽减少，但T细胞亚群之间的比例普遍失调；白介素、IFN-α及IFN-γ等细胞因子的代谢异常等。均提示体液免疫和细胞免疫调控机制的紊乱，直接或间接