sle病人及其子代与sle相关基因及抗体关系研究论文

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1、SLE病人及其子代与SLE相关基因及抗体关系研究论文孙焕霞苏厚恒崔佳佳李光文【摘要】目的探讨缓解期系统性红斑狼疮(SLE)病人所生子女罹患SLE的危险性。方法应用实时定量PCR技术检测14例SLE病人、病人子女及18例对照者HLADRB1*1501、DRB1*0301、DQA1*0102、DQB1*0602的频率,免疫印迹法检测入组者ENA抗体谱。结果SLE病人组DQA1*0102频率显著高于对照组(RR=2.02,P0.05),而两组间DRB1*1501、DRB1*0301、DQB1*0602频率比较差异无显著意义(P0.05);SLE病人组DQB1*0602频率显著高于其子

2、女组(RR=2.06,P0.05),而两组间DRB1*1501、DRB1*0301、DQA1*0102频率比较差异无显著性(P0.05);SLE子女组DQA1*0102频率显著高于对照组(RR=2.14,P0.05);而两组间DRB1*1501、DRB1*0301、DQB1*0602频率比较差异无显著性(P0.05)。SLE病人组自身抗体SSA及dsDNA出现频率明显高于对照组(P=0.019、0.015),两组间SSB及Ro52差异无显著性(P0.05);SLE病人子女组所测自身抗体检出率为0。结论HLADQA1*0102为SLE的易感等位基因,DQA1*0102有一定的遗

3、传倾向。经过系统治疗达到缓解期的SLE病人生育的子女罹患SLE的危险性无明显增加趋势。【关键词】红斑狼疮,系统性;HLA抗原;疾病遗传易感性;等位基因ABSTRACTObjectiveToexploretheriskofsufferingfromsystemiclupuserythematosus(SLE)inchildrenbornbypatientsasis.MethodsThefrequenciesofHLADRB1*1501,DRB1*0301,DQA1*0102andDQB1*0602allelesof14SLEpatientsandtheirchildren,and

4、20healthycontrolsePCRtechnologyandENAantibodyrepertoirebyimmunoblotting.ResultsInSLEgroup,thefrequencyofDQA1*0102alleleintermsofDRB1*1501,DRB1*0301,DQA1*0102allele(P0.05).InSLEchildrengroup,DQA1*0102allelefrequencyatictherapy,isnotincreased.KEYGenomicDNA提取试剂盒,按操作步骤提取上述实验对象全血DNA,置4℃保存,备用。1.2.

5、2PCR扩增采用实时定量PCR技术检测所有入组者的HLADRB1*1501、DRB1*0301、DQA1*0102、DQB1*0602等位基因。目的基因引物序列见表1,各对引物分别特异性扩增等位基因HLADRB1*1501、DQA1*0102、DQB1*0602、DRB1*0301。另外,设计一对上下游引物βaction作为内参照引物,以检测扩增体系。表1HLADRB1*1501、DQA1*0102、DQB1*0602、DRB1*0301引物序列等位基因引物序列引物源于CellMolNeurobiol2,引物均由上海生工生物工程技术服务有限公司设计合成。PCR反应体系20

6、μL,各反应体系均含有以下组分:带有Rox的PlatinumSYBRGreenqPCRSuperMixUDG10μL,10μmol/L正向引物(F)1μL,10μmol/L反向引物(R)1μL,模板DNA2μL,高压灭菌蒸馏水6μL。三步循环法PCR扩增条件:预先50℃UDG孵育2min,95℃预变性2min;然后95℃变性15s,退火温度退火45s,72℃延伸30s,共进行35个循环,最后4℃保存。HLADRB1*0301、DRB1*1501、DQA1*0102、DQB1*0602基因退火温度分别为56.7℃、62.3℃、58.4℃、62.3℃。研究对象部分PCR产物经

7、琼脂糖凝胶电泳检测等位基因扩增情况。1.2.3自身抗体ENA谱的检测采用免疫印迹法检测所有研究对象自身抗体ENA谱。1.3统计学处理基因频率的计算采用直接计数法,用精确检验四格表资料的Fasher确切概率法计算确切概率P值。对基因频率的差异有统计意义的等位基因进一步做疾病相关性分析,计算相对危险度RR。2结果2.1SLE病人DRB1*1501、DRB1*0301、DQA1*0102、DQB1*0602等位基因检测B组病人DQA1*0102等位基因频率显著高于A组(RR=2.02,

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