sle 相关基因 ifit1 免疫调节功能的初步

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1、SLE相关基因IFIT1免疫调节功能的初步【摘要】目的：研究系统性红斑狼疮（SLE）相关基因IFIT1的功能。方法：首先将IFIT1从穿梭表达克隆转入真核表达克隆，然后转导进入Jurkat细胞系，用有限稀释法筛选单克隆；再用CD3和CD28刺激单克隆，检测膜分子的表达、细胞凋亡、增生、细胞因子分泌等免疫生物学指标；最后应用RNAi技术，下调IFIT1的表达，检测细胞因子分泌，比较分析IFIT1的功能。结果：IFIT1的过度表达在T细胞中能诱导白细胞介素IL-4和IL-10的分泌增加，下调IFIT1的转录水平后能部分下调IL-4和IL-10表达，

2、而与细胞膜分子的表达、细胞的增生、凋亡无关。结论：SLE相关新基因IFIT1在细胞因子的产生中起了重要作用，可能与Thl/Th2的失衡有关。【关键词】系统性红斑狼疮；IFIT1；细胞因子；基因干预〔Abstract〕ObjectiveTostudythefunctionofIFIT1,anovelgeneassociatediclupuserythematosus(SLE).MethodsFirstanexpressioncloneofIFIT1inganLRrebinationreactionbetGenecopoieaandaGateiti

3、ngdilutionmethod.ThestabletransfectantsofEGFPandIFIT1-EGFPulatedetry.Theapoptosisandexpansionofeachtransfectantanufacture'sinstruction.TheculturesupematantsoretransfectionofgenesilencevectorallRNAduplexespartiallyblockedtheexpressionofoverexpressedIFIT1inJurkatTcel1.Thesamea

4、ssaysulationolecules,apoptosisandexpansionamongJurkat,Jurkat/EGFP,andJurkat/IFIT1-EGFPtransfectants.ButitayplayanimportantroleintheproductionofcytokinesandmayinterfereintheTh1/Th2balance.〔Keyiclupuserythematosus;IFIT1;Cytokines;Geneinterfere系统性红斑狼疮（SystemicLupusErythematosus

5、,SLE）是由遗传、性激素、感染、环境等因素相互作用所致的一种多层次免疫功能异常的自身免疫性疾病。大量研究证实，基因水平的免疫调节障碍及细胞因子代谢紊乱在SLE中表现突出，直接或间接地参与了SLE的形成和发生发展过程。近年来，随着基因分析技术的不断发展和相关研究的深入，一些SLE相关基因不断浮出水面，其中尤以IFIT1备受关注。有证据表明IFIT1在T细胞经CD3/CD28激活的信号传导通路中参与了细胞因子合成的调控，在SLE进程中起着举足轻重的作用[1，2]。本研究拟通过建立稳定过表达IFIT1的转染T细胞系，采用基因干预技术（RNAi）下调

6、IFIT1的表达，检测有关免疫学指标，进一步阐明IFITI在T细胞中的功能。1材料与方法1.1主要试剂和仪器1.1.1主要试剂抗CD3/CD28单克隆抗体、PE交联免疫细胞膜分子系列抗体、Percp交联抗小鼠Ig抗体、细胞因子（IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ）、AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒、细胞增生检测试剂盒、RNAi试剂盒及质粒抽提试剂盒购自晶美公司；Jurkat细胞、IFIT1的穿梭表达克隆和Gateaxa公司的电转导仪和Biod公司的全自动iCYCLE型荧光PCR定量分析仪。1.2Jurkat稳定转染细胞系的建立将

7、IFIT1的穿梭表达克隆与GateE.coli，经氨苄青霉素和氯霉素筛选阳性表达菌株，扩增培养后抽提质粒；同时制备仅表达EGFP的pcDNA-DEST47质粒，作为对照。采用电转导仪，分别将质粒pcDNA/EGFP和pcDNA/IFIT1-EGFP电转导入Jurkat细胞，48h后，加G418至终浓度1200g/mL，2周后再经有限稀释筛选表达EGFP和IFIT1-EGFP蛋白的克隆细胞株J/EGFP和J/IFIT1-EGFP，经荧光显微镜观察和定量PCR验证所得克隆为稳定表达细胞株，同时冻存细胞株备用。所用IFIT1的引物由深圳匹基公司合成，

8、ForL）和CD28（2g/mL）包被至24孔Costar板中，4℃孵育8h，每孔加入含1×106个细胞的500L培养液，37℃，5%CO2培养3d，