pdtc逆转k562-ao2细胞多药耐药性机制研

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1、PDTC逆转K562/AO2细胞多药耐药性机制研【摘要】目的研究核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)逆转K562/AO2细胞耐药效应及其机制。方法采用MTT比色法分别检测K562/AO2细胞的耐药性、PDTC对K562/AO2细胞增殖的影响以及非细胞毒剂量PDTC、维拉帕米(Ver)预作用后K562/AO2细胞药物敏感性的变化，采用免疫细胞组织化学法、RT-PCR检测K562、K562/AO2细胞NF-κB、mdr-1mRNA表达水平以及PDTC作用一定时间对其影响。结果①K562/AO2细胞对阿霉素(ADM)的耐药性是K562细胞的

2、59倍;非细胞毒剂量PDTC预作用后，ADM对K562/AO2细胞的半数抑制浓度(IC50)显著降低，相对逆转耐药效率为93.03%，强于经典耐药逆转剂Ver的作用81.07%(P<0.01);②K562/AO2细胞NF-κB表达水平高于K562细胞(P<0.01);PDTC可有效抑制K562/AO2细胞NF-κB表达，伴随mdr-1mRNA表达减少，呈时间依赖性。结论抑制NF-κB异常活化可部分逆转K562/AO2细胞耐药性，其机制与mdr-1mRNA转录表达减少有关。【关键词】吡咯烷二硫代氨基甲酸盐;核因子κB;K562/AO2细胞;多药耐药;m

3、dr-1基因　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofpyrrolidinedithioearbama(PDTC),aninhibitorofnuclearfactorκB(NF-κB)activityonreversingthechemoresistanceofK562/AO2cellsanditsmechanism.MethodsHumanerythroleukemiccelllineK562anditsadriamycin-resistantcounterpartK562/AO2cellsployedtodet

4、ectthemultipledrugresistanceofK562/AO2cells,theeffectofPDTConcellproliferationandthevariationsindrugsensitivityofK562/AO2cellspretreatedil(Ver)innoncytotoxicdose.ImmunocytohistochemicalmethodandRT-PCRdr-1mRNAinK562andK562/AO2cells,respectively,andtheeffectofPDTCtreatmentatdifferentti

5、mepoints.Results①ThedrugresistanceofK562/AO2cellstoADMesasmuchasthatofK562cells.DR)于1970年由Biedler和Riehm[1]首次报道，是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时，对结构和作用机制不同的多种抗肿瘤药物交叉耐药。MDR是化疗失败和肿瘤复发的主要原因，成为当前肿瘤药物治疗中亟待解决的问题。多药耐药机制复杂，以mdr-1/P-gp研究最为广泛和深入[2-3]。我们前期的研究发现，抑制核因子κB(NF-κB)的异常活化可以诱导肿瘤细胞凋亡[4]，本实验进一步研究NF-

6、κB对K562/AO2细胞mdr-1mRNA表达的影响。　　1材料和方法　　1.1主要试剂RPMI1640培养基购自GIBCO公司，胎牛血清购自杭州四季青生物公司，PDTC、MTT购自Sigma公司，阿霉素(ADM)购自浙江海正药业公司，维拉帕米(Ver)购自上海禾丰制药公司，NF-κB鼠抗人单克隆抗体购自SantaCrus公司，二步法免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司，细胞总RNA提取试剂盒、RT-PCR第一链cDNA合成试剂盒、PCR试剂盒、DNAMarker购自天为时代科技有限公司。　　1.2细胞株及培养人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K56

7、2、人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞ADM耐药株K562/AO2均购自中科院血研所。实验前两株细胞均培养于含10%胎牛血清，青、链霉素各100×103U/L的RPMI1640培养基中，置37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中。K562/AO2细胞在培养过程中加ADM1mg/L以维持耐药性，实验前2周停药。　　1.3方法　　1.3.1MTT法检测PDTC对K562/AO2细胞生长的影响调整K562/AO2细胞密度为2×105/ml铺96孔板，各孔加入100μl细胞悬液和100μl不同浓度PDTC(终浓度0.04、0.16、0.6、2.5、10、40、160μm

8、ol/L)，设等量PBS