calphostin c对乳腺癌细胞增殖的抑制作用及相关机制

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1、CalphostinC对乳腺癌细胞增殖的抑制作用及相关机制：千新来，崔静，任峰，赵杰，冶亚平，贺国洋，李新强，朱慧芳，韩芳毅，杨慧林，王霞，原志庆【摘要】　　目的研究CalphostinC对乳腺癌细胞MDAMB435S增殖的影响及初步机制。方法通过观察CalphostinC处理MDAMB435S细胞前后细胞的生长速度、倍增时间、克隆形成率和细胞周期分布等变化，探讨CalphostinC对MDAMB435S细胞增殖的影响；通过DAMB435S细胞增殖的初步机制。结果与MDAMB435S亲本细胞(对照组)相比，CalphostinC处理的

2、MDAMB435S细胞(实验组)生长速度明显减慢，倍增时间明显延长(P<0.01)，并且呈现浓度和时间依赖性；对照组和实验组细胞克隆形成率分别为(82.33±6.81)%和(22.00±1.73)%，差异有统计学意义(P<0.01)；实验组细胞周期出现明显的G1期阻滞(P<0.01)。DAMB435S的增殖，该作用可能与其抑制PKCα活性、上调p21表达和下调CyclinE表达有关。【关键词】钙磷酸蛋白C；蛋白激酶C；乳腺癌；增殖　　China)ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectsofCal

3、phostinContheproliferationofbreastcarcinomacells(MDAMB435S)anditspreliminarymechanism.MethodsTheeffectsofCalphostinContheproliferationofMDAMB435Scellse,cloneformingefficiency,anddistributionofcellcycleofMDAMB435ScellsbeforeandafterCalphostinCtreatment.Furthermore,themechan

4、isminvolvedmunocytochemistryandRTPCRassay.Resultsparedarkedlyandthedoublingtimeentalgroup),andthechangespresentedconcentrationandtimedependencepatterns.Furthermore,thecloneformingefficiencyincontrolgroupandexperimentalgroupentalgroupcells,thecellcyclearrestedinG1phase(P<0.

5、01).TheresultsfromDAMB435ScellstreatedarkedlytheproliferationofMDAMB435Scells,aybecorrelatedtotheabilitiesofinhibitingPKCαactivity,upregulatingtheexpressionofp21anddoa;proliferation　　肿瘤细胞过度增生与有丝分裂信号途径相关基因过度表达密切相关，而蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)的过度激活在后者中起重要作用[1]，提示PKC的过度激活可能与肿瘤的发生

6、发展有关。越来越多的证据显示,多种肿瘤(如乳腺癌、恶性神经胶质瘤等)组织中PKC的表达和活性都远高于相应的正常组织[2]。因此，PKC是一个潜在的有价值的抗肿瘤治疗靶点[1]。PKC特异抑制剂钙磷酸蛋白(Calphostin)是一类菌类分支孢子菌属分子孢子提取物，以CalphostinC最具代表性[34]。乳腺癌的发生率在世界范围内仍呈上升趋势，我国乳腺癌发生率增加速度(3%～5%)明显高于世界平均水平(1.5%)[5]。鉴于以上研究及国内、外尚未见CalphostinC对乳腺癌作用的相关报道，本研究拟以乳腺癌细胞MDAMB435S为研究对象，探讨

7、CalphostinC对乳腺癌细胞增殖的影响和初步机制。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1主要试剂　　CalphostinC为美国Calbiochem公司产品；胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)为杭州四季青公司产品；逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RTPCR)试剂盒、TaqDNA聚合酶和dNTPs等为美国Promega公司产品；Trizol试剂、蛋白分子量标准、100bpDNAMarkers和DMEM/F12培养基等为美国Invitrogen公

8、司产品；二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、丙烯酰胺、甲