miR-206对三阴性乳腺癌细胞的增殖抑制作用及初步机制研究-论文.pdf

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1、·1062·临床肿瘤学杂志2013年12月第18卷第12期ChineseClinicalOncology，Dec．2013，Vo1．18，No．12miR．206对三阴性乳腺癌细胞的增殖抑制作用及初步机制研究210000南京南京医科大学第二附属医院肿瘤科石永国，卞卫和，何烨，丁洁，周晶，王科明，【摘要】目的探讨miR-206对三阴性乳腺癌细胞MDA．MB-231增殖的影响及其作用机制。方法转染miR-206mimic和miR．NC至乳腺癌细胞株MDA．MB-231中，应用实时荧光定量PCR(qRT．PCR)技术检测m

2、iR-206相对表达水平；应用MTI'法、克隆形成实验检测miR-206对MDA．MB-231细胞增殖能力的影响；流式细胞术检测miR-206对细胞周期的影响；Westernblotting进一步验证miR-206对周期相关蛋白CyclinD2的影响。结果qRT—PCR检测结果显示，miR一206mimic转染至MDA．MB-231乳腺癌细胞48h后miR-206的相对表达水平为10．2±1．5。MTr法检测结果显示，miR-206mimic转染至MDA．MB-231乳腺癌细胞6、24、48、72、96h后的增殖抑制

3、率分别为(04-0．O1)％、(0．124-0．03)％、(0．214-0．08)％、(0．284-0．11)％和(0．394-0．16)％；克隆形成实验结果显示，miR-206mimic和miR—NC转染至MDA—MB-231乳腺癌细胞2周后的克隆数目分别为1064-35和843±143，差异具有统计学意义(P<0．01)。流式细胞术检测结果显示，miR-206mimic转染至MDA．MB-231乳腺癌细胞48h后，明显地阻滞细胞周期于G1期；Westernblotting检测显示miR-206表达下调了细胞周期蛋

4、白CyclinD2的表达。结论miR-206明显抑制了三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖，其机制可能与下调细胞周期蛋白CyclinD2的表达有关，这将成为乳腺癌临床治疗一个新的靶点。【关键词】miR-206；细胞周期蛋白D2；乳腺癌中图分类号：R737．9文献标识码：A文章编号：1009—0460(2013)12—1062—04TheinhibitoryefectsofmiR-206ontripienegativebreastcancercellproliferationanditsmechanismSH／

5、Yongguo，BIAN耽e，HEYe，DINGJie，ZHOUJing，WANGKeming．DepartmentofOncology，theSecondAffiliatedHospitalofNanfingMedicalUniversity，Nanjing210000，ChinaCorrespondingauthor：WANGKeming，E-mail：wkmys@sohu．corn【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheefectofmiR-206ontheproliferatio

6、noftriplenegativebreastcancercellMDA—MB一231invitroanditsactionmechanism．MethodsMiR-206MiR．206mimicandmiR．NCweretransfectedintoMDA．MB-231breastcancercel1．TheexpressionlevelofmiR-206wasdetectedbyrealtimequantitativePCR(qRT-PCR)．MTYandcolonyformationas—sayswereuse

7、dtodetecttheefectofmiR-206onbreastcancercellproliferation．Flowcyt0metrywasusedtodetecttheefectoncellcycle．WesternblottingwasusedtoanalyzetheexpressionofcyclinD2inbreastcancercellaftertransfectedwithmiR-206．ResultsTheresultsofqRT-PCRshowedthattherelativeexpressi

8、onofmiR-206was10．24-1．5whenMiR-206mimicwastransfeetedintoMDA-MB-231breastc~qeercellfor48h．TheinhibitionrateofMDA—MB-231breastco／leercellwhichwastransfectedbymiR-206mimicfor6