egfr表达的相关因素分析

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1、EGFR表达的相关因素分析【关键词】EGFR表达；基因扩增；CA-SSR1多态性表皮生长因子受体(epidermalgroalgroplesequencerepeat，CA-SSR1）；增强子3位于启动子上游（－1，439～－1，109）。其中增强子2必须依靠增强子3才能发挥调节EGFR基因转录活性的作用。2EGFR基因扩增与EGFR表达基因扩增是指某一些特定亚染色体区段拷贝数的增加，而不包括整个基因组、染色体、臂或大片段染色体区域的扩增。基因扩增通常意味着这些基因的过度表达。尽管EGFR基因扩增的机制还不是很清楚，但近年来关于EGFR基因扩增的资料却在不断的增加。正常或重组的E

2、GFR基因扩增见于约50％的脑胶质细胞瘤及某些鳞癌。Ekstrand，A.J.等［1］报道在36例Ⅳ级脑胶质细胞瘤（34例原发，2例复发）病人中，发现50％的病人EGFR基因扩增（与2倍体相比）10-110倍，在16例基因扩增的病人中有13例mRNA表达增加（≥＋＋，“＋＋＋”表示mRNA表达与“A431”细胞珠相等），免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）结果分析显示EGFR蛋白表达与转录水平有很好的相关性。而ChristineH等［2］用DNA微阵列技术研究了33例头颈部鳞癌标本，实验结果统计分析显示mRNA表达与基因复制无关（P=0.37Stude

3、nt’stest）；为了进一步证实此结果ChristineH等用敏感性高的RT-PCR来分析具有代表型性的13例头颈部鳞癌标本（4例基因扩增，3例高异倍体，3例低异倍体，2例3倍体；1例正常即2倍体）。结果显示在荧光原位杂交（Fluoresceneinsituhybridization，FISH）实验中，结果阳性与阴性的标本，总RNA的表达无差别（P=0.72Student’stest）；同样，50例头颈部鳞癌IHC实验结果显示EGFR蛋白表达水平与FISH实验结果无关（P=0.72Fisher’sexacttest）。ChristineH等分析以上实验结果可能的原因如下：1.表

4、型遗传机制，比如启动子甲基化导致绝大多数EGFR基因复制无转录活性。在这种情况下，因为遗传压力基因复制增多，但在肿瘤形成阶段却无转录活性；2.基因复制可能被转录，但转录后的RNA异常剪接；异常剪接的RNA不能与cDNA探针结合，导致DNA微阵列及RT-PCR实验结果呈阴性；3.IHC技术在量化评价EGFR蛋白上的局限性。HirschFR等［3］报道了69例非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)病人：EGFR蛋白表达阴性或低的病例中，有35例（51％）为二倍体，33例（48％）为三倍体，1例为多倍体；相反，46例蛋白表达中等的病例中，有8例（17

5、％）为多倍体或基因扩增；68例蛋白呈高表达的病例中，30例（44％）为多倍体或基因扩增。统计分析显示，蛋白表达与基因复制密切相关（P<0.001）。IHC结果评分如下：2倍体：206分；3倍体：213分；多倍体：355分；基因扩增：367分。从以上数据可以看出2倍体或3倍体对蛋白表达没有明显影响，而多倍体及基因扩增对蛋白表达有影响。实验中9％的病人基因扩增，其蛋白全部呈过度表达。DziadziuszkoR等［4］报道66例NSCLC病人的mRNA含量与基因扩增密切相关（P=0.001），进一步证实了HirschFR等［3］的报道。以上报道证实EGFR基因扩增是EGFR蛋白过

6、度表达的机制之一，特别是在脑胶质细胞瘤中。3EGFR基因多态性与EGFR表达3.1内含子1双核苷酸CA简单重复序列（CA-SSR1）多态性与EGFR表达EGFR基因的转录活性主要依靠增强子2和增强子3的共同作用［5］。CA-SSR1（9-23个CA简单重复序列）位于下游增强子（增强子2）附近。虽然远离上游启动子1000多个碱基，但螺旋结构理论认为：该多态区域在转录方面可能有调节作用。GebhardtF等［6］用7种细胞珠(SK-BR-3,MCF-7,MKN-7,BT-474,HBL-100,MDA-MB-468,MDA-MB-231）进行体外和体内的转录实验。这些细胞株只有CA-

7、SSR1的多态性，而无其他任何突变，从而排除了基因突变对转录活性的影响。两种实验途径均证实CA重复次数增多转录活性下降；但在体内的转录实验中，MKN-7细胞株（20/20CA）不支持上述实验结论。针对这一现象，GebhardtF等推测可能有别的机制能增加EGFR基因的转录活性，并能克服CA-SSR1的转录抑制作用。GebhardtF等［7］又提出CA-SSR1连接转录因子后能改变DNA的结构。后来HorstBuerger等［8］用酶联免疫吸附实验(enzymelinkedim-m