ep2在海马齿状回突触传递中的作用

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1、EP2在海马齿状回突触传递中的作用【摘要】目的探讨EP2在小鼠海马齿状回突触传递中的作用及其机制。方法细胞外记录技术记录海马脑片穿通纤维-齿状回颗粒细胞突触的场兴奋性突触后电位(fEPSP)。结果①EP2的激动剂Butaprost增强海马齿状回突触传递和降低双脉冲比(paired-pulseratio,PPR)，此效应被EP2的拮抗剂AH6809所阻断。②Forskolin单独或Forskolin+AH6809均可增强fEPSP的斜率。③EP2增强突触效能的效应由PKA，ERK和IP3途径介导。结论多信号转导途径可能参与EP2激活诱导的突触传递增强。【关键

2、词】前列腺素；环氧合酶-2(COX-2)；EP2；突触传递；海马ChinaABSTRACT:ObjectiveToevaluatetheroleofEP2insynaptictransmissionindentategyrusofhippocampus.MethodsFieldexcitatorypost-synapticpotentials(fEPSP)issionindentategyrusanddecreasedthepaired-pulseratio,andtheseeffectsediatedviaPKA,ERKandIP3signalpathe

3、diatedenhancementofsynaptictransmission.　　KEYP生成减少，而EP2和EP4与Gs-cAMP-PKA途径相藕联引起cAMP增加[5,7]。研究表明PGE2在调制突触活动的效能是通过激活突触前的EP2起作用的[8-9]，但EP2在突触传递中的作用还远未阐明。本研究拟探讨EP2在海马齿状回穿通纤维-颗粒细胞突触传递中的作用及其信号转导机制。　　1材料与方法　　1.1海马脑片准备　　采用C57BL/6雄性小鼠，体重20～25g。海马脑片的制备如文献所述[3-4]。简言之，小鼠断头后将脑迅速置于0～4℃以950mL/LO2

4、+50mL/LCO2混合气饱和的低Ca2+/高-Mg2+的切片用液(mmol/L)：2.5KCl，7.0MgCl2，28.0NaHCO3，1.25NaH2PO4，0.5CaCl2，7.0葡萄糖，3.0丙酮酸，1.0抗坏血酸，234蔗糖。脑片被切成350μm厚的薄片，将其转移到含被氧饱和的人工脑脊液(artificialcerebrospinalfluid,ACSF)的烧杯中进行孵育，ACSF的组成为(mmol/L)：125.0NaCl,2.5KCl，1.0MgCl2，25.0NaHCO3，1.25NaH2PO4，2.0CaCl2，25.0葡萄糖，3.0丙酮

5、酸，1.0抗坏血酸。在36℃孵育0.5～1h，然后置于室温(22～24℃)至少1.5h后可进行电生理记录。记录时将脑片转移至标本室，并在32～34℃连续地被950mL/LO2，50mL/LCO2饱和的ACSF灌流。在配有×60的入水镜头和直立式微分干涉相差显微镜(OlympusBX51SO；Sigma)，在临用前用ACSF分别稀释成所需浓度的工作液，工作液中DMSO的终浓度不超过1.4mmol/L。　　1.3电生理记录　　使用Axoclamp-2B膜片钳放大器的桥式整流模式(bridgemode)在齿状回刺激穿通纤维，刺激频率0.05Hz，记录场兴奋性突触

6、后电流(fieldexcitatorypost-synapticpotential,fEPSP)[4]。细胞外液组成为(mmol/L)：130.0NaCl，2.5KCl，1.0MgCl2，10.0HEPES，1.25NaH2PO4，2.0CaCl2，25.0葡萄糖(pH7.4)。记录电极充灌ACSF(2～4MΩ)，置于齿状回的分子细胞层。取三分之一的fEPSP最大反应的刺激作为基线的刺激强度，双脉冲刺激(paired-pulsestimulation)诱导的脉冲间隔为40ms。双脉冲比值(paired-pulseratio,PPR)是第2个EPSP的幅值(

7、P2)与第1个EPSP的幅值(P1)之比，即P2/P1。所有的浴槽灌流液均含有荷包牡丹碱(bicuculine,10μmol/L)以阻断GABA受体介导的反应。　　1.4统计学处理　　所有数据以均数±标准误表示，均数间差异的显著性检验用Studentst-test及方差分析(ANOVA)，在需要时可结合学生Nean-Keuls检验进行统计学差异的比较。P<0.05为差异有显著性。　　　2结果　　2.1EP2的激动剂Buta增强海马齿状回突触传递　　为阐明EP2在海马齿状回突触传递中的作用，观察EP2激动剂Buta对fEPSP的影响。记录fEPSP至

8、少10min作为基线，给予Buta(5μmol/L)作用10min