ep2在海马齿状回突触传递中的作用

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1、EP2在海马齿状回突触传递中的作用环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是转化花生四烯酸(arachidonicacid,AA)为不稳定的中间产物PGG2的限速酶[1-2]。COX-2参与兴奋性谷氨酸能神经传递和长时程突触可塑性[3-5]，并在神经源性炎症发生中起关键作用。前列腺素E2(prostagladinE2,PGE2)主要于COX-2氧化途径，研究表明PGE2是COX-2介导的突触效能变化的重要信使[3,6]。已经有4种PGE2的受体(PGE2receptors,EPs)被鉴定和克隆，分别为EP1、EP2、EP3和EP4

2、及EP3的多剪接异构体[5,7]。EPs属于7次跨膜结构的G蛋白藕联受体(Gprotein-coupledreceptors,GPCRs)，这些EP受体亚型呈现明显不同的信号转导途径和细胞反应。EP1的激活增加细胞内Ca2+水平，并与Gq-PLC-IP3和蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)相藕联；EP3是与百日咳毒素敏感的Gi蛋白关联，导致cAMP生成减少，而EP2和EP4与Gs-cAMP-PKA途径相藕联引起cAMP增加[5,7]。研究表明PGE2在调制突触活动的效能是通过激活突触前的EP2起作用的[8-9]，但EP2在突触传递中的

3、作用还远未阐明。本研究拟探讨EP2在海马齿状回穿通纤维-颗粒细胞突触传递中的作用及其信号转导机制。　　1材料与方法　　1.1海马脑片准备　　采用C57BL/6雄性小鼠，体重20～25g。海马脑片的制备如文献所述[3-4]。简言之，小鼠断头后将脑迅速置于0～4℃以950mL/LO2+50mL/LCO2混合气饱和的低Ca2+/高-Mg2+的切片用液(mmol/L)：2.5KCl，7.0MgCl2，28.0NaHCO3，1.25NaH2PO4，0.5CaCl2，7.0葡萄糖，3.0丙酮酸，1.0抗坏血酸，234蔗糖。脑片被切成350μm厚的薄片，将其转移到

4、含被氧饱和的人工脑脊液(artificialcerebrospinalfluid,ACSF)的烧杯中进行孵育，ACSF的组成为(mmol/L)：125.0NaCl,2.5KCl，1.0MgCl2，25.0NaHCO3，1.25NaH2PO4，2.0CaCl2，25.0葡萄糖，3.0丙酮酸，1.0抗坏血酸。在36℃孵育0.5～1h，然后置于室温(22～24℃)至少1.5h后可进行电生理记录。记录时将脑片转移至标本室，并在32～34℃连续地被950mL/LO2，50mL/LCO2饱和的ACSF灌流。在配有×60的入水镜头和直立式微分干涉相差显微镜(Oly

5、mpusBX51SO；Sigma)，在临用前用ACSF分别稀释成所需浓度的工作液，工作液中DMSO的终浓度不超过1.4mmol/L。　　1.3电生理记录　　使用Axoclamp-2B膜片钳放大器的桥式整流模式(bridgemode)在齿状回刺激穿通纤维，刺激频率0.05Hz，记录场兴奋性突触后电流(fieldexcitatorypost-synapticpotential,fEPSP)[4]。细胞外液组成为(mmol/L)：130.0NaCl，2.5KCl，1.0MgCl2，10.0HEPES，1.25NaH2PO4，2.0CaCl2，25.0葡萄糖

6、(pH7.4)。记录电极充灌ACSF(2～4MΩ)，置于齿状回的分子细胞层。取三分之一的fEPSP最大反应的刺激作为基线的刺激强度，双脉冲刺激(paired-pulsestimulation)诱导的脉冲间隔为40ms。双脉冲比值(paired-pulseratio,PPR)是第2个EPSP的幅值(P2)与第1个EPSP的幅值(P1)之比，即P2/P1。所有的浴槽灌流液均含有荷包牡丹碱(bicuculine,10μmol/L)以阻断GABA受体介导的反应。　　1.4统计学处理　　所有数据以均数±标准误表示，均数间差异的显著性检验用Studentst-

7、test及方差分析(ANOVA)，在需要时可结合学生Nean-Keuls检验进行统计学差异的比较。P<0.05为差异有显著性。　　　2结果　　2.1EP2的激动剂Buta增强海马齿状回突触传递职称论文发表费用　　为阐明EP2在海马齿状回突触传递中的作用，观察EP2激动剂Buta对fEPSP的影响。记录fEPSP至少10min作为基线，给予Buta(5μmol/L)作用10min，然后用细胞外液冲洗30min至实验结束。Buta明显降低PPR，由用药前的1.32±0.054降低至用药后的1.09±0.035(6～10min)(P<0.01，

8、图1A和1B)；而在AH存在的情况下，Buta在用药前后PPR没有明显变化[(1.29±0.052)%vs.