斑蝥酸钠对膀胱癌ej细胞株毒性作用的研究

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1、斑蝥酸钠对膀胱癌EJ细胞株毒性作用的研究【摘要】目的：探讨斑蝥酸钠对膀胱癌EJ细胞株的毒性作用。方法：采用5，10，20μg/ml斑蝥酸钠作用于EJ细胞株2，4，24，48h后，观察细胞形态改变，MTT法检测药物对细胞生长的影响，流式细胞仪检测细胞增殖周期的改变以及细胞凋亡情况。结果：5μg/ml斑蝥酸钠作用2，4h后细胞无明显改变，10，20μg/ml作用2，4h后细胞出现水肿、空泡、核固缩以及细胞溶解现象;药物作用细胞后其抑制率显著增高(P<0.05);细胞周期中G2/M期延长，细胞凋亡明显增加(P<0.

2、05)。结论：斑蝥酸钠对膀胱癌EJ细胞株有明显的毒性作用，通过诱导细胞凋亡的途径抑制细胞生长。【关键词】斑蝥酸钠;膀胱癌;EJ细胞;凋亡[Abstract]Objective:TostudythecytotoxicefficacyofsodiumcantharidinateagainsthumanbladdercancerEJcell.Methods:AfterthebladdercancerEJcelllsodiumcantharidinateon2，4，24，48h,thecytologyvariationate

3、dusingMTTassay，andcellcycleperturbationsorapoptosisetry.Results:Itlsodiumcantharidinateafter2-4hourstothebladdercancerEJcell，andtherel.AndcellcantharidinatehadobviouscytotoxicefficacyandinhibitedgroanbladdercancerEJcell.　　[Keycantharidinate;bladdercancer;EJcel

4、l;apoptosis　　斑蝥酸钠系斑蝥素的半合成衍生物，临床多单独或联合用于中晚期恶性肿瘤如肝癌、胃癌的治疗[1-3]，与斑蝥素相比，其毒性、刺激性较小[4]。在初步观察了斑蝥酸钠对离体膀胱组织的杀伤作用后[5]，本实验在体外研究其对膀胱癌EJ细胞株的毒性作用及对膀胱癌细胞凋亡的诱导情况，以探讨斑蝥酸钠影响膀胱癌细胞生长的可能机制。　　1材料与方法　　1.1材料　　人膀胱癌EJ细胞株由北京大学泌尿外科研究所惠赠，细胞培养基为含10%灭活胎牛血清的RPMI1640(Gibco/BRL公司),斑蝥酸钠注射液(商品名：奇宁注

5、射液)，为贵州神奇制药有限公司生产，MTT购自北京市普京康生物工程有限公司;AnnexinVFITC凋亡试剂盒为美国BD公司生产。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养　　用含10%灭活胎牛血清的RPMI1640培养基，饱和湿度、5%CO2、37℃孵育箱中进行细胞培养，取对数生长期的细胞进行体外实验。　　1.2.2细胞形态观察及其抑制率的检测　　选已铺成单层的处于对数生长期的细胞(2×106个细胞)，将其培养液弃去，对照组加培养液，试验组加含斑蝥酸钠5，10，20μg/ml浓度的培养液，每组3个孔，2，4，24，48h观

6、察其形态。然后每孔加入5mg/ml浓度的MTT20μl，孵育4h后，MTT法评价其细胞毒效应，检测570nm波长处的光密度(D)值，计算其抑制率。细胞抑制率/%=对照孔D(570nm)-实验孔D(570nm)对照孔D(570nm)　　1.2.3细胞周期分布及凋亡的测定　　使用6孔板接种EJ细胞2×106，加5，10μg/ml斑蝥酸钠的培养液，24，48h后用0.25%胰蛋白酶消化，收集各时相细胞，1000r/min离心5min，弃上清，PBS洗2次，用标记缓冲液将细胞配成1×106个/ml，取100μl细胞悬液加入5ml

7、的培养管中，加入5μlPI和5μlAnnexinVFITC双染试剂，混匀，室温避光染色15min，再加入标记缓冲液400μl，用美国BD公司生产的FACS420型流式细胞仪进行分析。　　1.3统计学处理　　采用Excel及SPSS12.0软件分析处理数据，行t检验，组间比较用单因素方差分析。　　2结果　　2.1不同浓度斑蝥酸钠作用后细胞形态的变化　　对照组细胞胞质均匀，胞核形态正常，边界清楚，核仁清晰可见。5μg/ml斑蝥酸钠作用2～4h后无明显改变，24h后细胞出现水肿，核形态正常;10μg/ml作用4h后细胞水肿

8、加重，胞质可见片状空泡改变，细胞核固缩，24h后细胞大多数死亡;20μg/ml作用4h后细胞裂解死亡(图1)。a：对照组;b：5μg/ml斑蝥酸钠作用4h;c：5μg/ml斑蝥酸钠作用24h;d：10μg/ml斑蝥酸钠作用4h;e：10μg/ml斑蝥酸钠作用24h;f：20μg/ml斑蝥酸钠作用4h图1斑蝥酸钠作用于