斑蝥酸钠膀胱灌注抑制大鼠膀胱癌生长过程的实验研究

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1、斑蝥酸钠膀胱灌注抑制大鼠膀胱癌生长过程的实验研究吕光耀1付启忠1杨建勋1董圣芳1刘颖1刘险峰1朱瑞萍21.大连大学附属中山医院泌尿外科辽宁大连116001;2.大连大学附属中山医院病理科辽宁大连116001摘要：目的：探讨斑蝥酸钠膀胱灌注对大鼠膀胱肿瘤生长的抑制作用和机制。方法：90只雌性大鼠随机分为三组，标准组注入MNU;实验组注入MNU0.1ml+斑蝥酸钠注射剂；对照组注入MNU+0.9%NaCI溶液，第7和13周进行病理观察，第13周测量膀胱质量，免疫组织化学法检测微血管密度(MVD),流式细胞仪测凋亡指数(AI)。结果：第7周标准组和对照组成瘤的数

2、量及级别较实验组高(P<0.01),第13周实验组大鼠膀胱质量小于标准组及对照组(P<0.01),实验组成瘤数及肿瘤瘤大小、质量、恶性程度均低于标准组及对照组(P<0.01)。实验组大鼠膀胱肿瘤的MVD小于标准组及对照组(P<0.01)。实验组大鼠的AI值明显高于标准组及对照组(P<0.01)o结论：斑蝥酸钠膀胱灌注能有效的抑制大鼠膀胱肿瘤细胞的生长。关键词：斑蝥酸钠注射液；膀胱癌；凋亡；大鼠浅表性膀胱癌在行经尿道膀胱肿瘤切除术后有较高的复发，术后抗肿瘤药物膀胱灌注治疗是解决术后高复发问题重要方法［1］。目前应用于膀胱灌注的抗

3、肿瘤药物多种多样，尚没有一种药物能彻底解决术后复发问题，不断探索新型高效、低毒的膀胱灌注药物一直是学术界努力的方向。木研究通过大鼠动物实验观察研究斑蝥酸钠膀胱灌注对大鼠膀胱癌的作用，并初步探讨其抗肿瘤的疗效及机制。1材料与方法1.1材料：实验动物和分组：雌性Wistar大鼠90只，10周龄，体质量(200&plUsmn;10)g。大鼠随机分为标准组、对照组和实验组，每组各30只。主要试剂与设备：N-甲基善亚硝基脲(MNU),用临时配置的pH6.0的枸橼酸盐缓冲液调整浓度为10mg/mL及20mg/mLo斑整酸钠注射液：规格2ml：0.2mg。免疫组化染色试

4、剂盒；细胞凋亡检测试剂盒。流式细胞仪。1.2方法1.2.1膀胱癌模型制作和用药：三组人鼠均采用膀胱灌注法给予MNU,膀胱内保留2小吋。实验前10%的水合氯醛，按lml/kg剂量予腹腔内注射麻醉，从尿道外U插入膀胱腔，抽尽尿液后注入诱癌剂MNU，保留2小吋，每2周1次，共4次，总剂量8mg。标准组注入浓度为10mg/mL诱癌剂MNU0.2ml;实验组注入20mg/mL诱癌剂MNUO.lml,同吋加入抑癌剂斑蝥酸钠注射剂0.1ml;对照组注入20mg/mL诱癌剂MNUO.lml,同吋加入0.9%NaCI溶液0.1ml。1.2.2病理观察：三组于第3周开始分别处

5、死5只大鼠，以后每隔2周处死5只大鼠至第13周；完整取出大鼠膀胱，称膀胱质量。将新鲜的膀胱组织浸于10%甲醛液中固定24h，常规石蜡包埋，HE染色，显微镜下观察组织病理学变化情况。1.2.3免疫组化检测：石蜡标本块切片，免疫组织化学方法标记微血管。单盲情况下，400倍镜下计数染成棕黄色的血管数0，以5个视野下血管数0的平均值表示微血管密度（MVD）。1.2.4流式细胞仪检测：切取各组病理取材后的肿瘤组织，PBS漂洗，2000不锈钢筛研磨过滤，吸取滤过的单细胞悬液置离心管中，离心5min,弃上清，调整细胞浓度为l×106/mL,以细胞凋亡检测试剂

6、盒检测凋亡指数（AI）。1.3,统计学分析：统计学方法实验数据采用SPSS11.5软件包分析，计量资料采用和t检验，计数资料采用Fisher’s确切概率法检验，以P<0.05为差异，有统计学意义。2结果2.1—般状态：各组大鼠存活情况和一般状态观察大鼠在膀胱灌注后2.0〜2.5h排尿，3.0〜4.0h后恢复活动，诱癌期间各组大鼠毛色、食量、营养状况及体质量等一般情况无明显差别。实验过程中共有85只大鼠正常存活，其中对照组28只、实验组29只、标准组28只。2.2病理学观察：对照组、标准组：第7周吋，可见膀胱内微小结节和突起；光镜下移行上皮细胞层

7、数增多，排列紊乱,分布不均匀，可见核分裂像，为不典型增生和移行细胞I级。第13周时，各组大鼠膀胱均可见菜花状、多发、大小不一的肿物；光镜下膀胱黏膜细胞大小不一，细胞层数明显增多，排列非常紊乱，核大不规则，核质比例增人，核分裂像明显，可见不同级别的肿瘤组织，并侵入肌层。实验组：第13周时可见膀胱内微小结节；光镜下移行上皮细胞层数增多，核染色质为颗粒状，分布不均匀，为不典型增生。(3)实验组大鼠膀胱质量明显小于标准组及对照组(P<0.01)；实验组大鼠膀胱肿瘤的MVD小于标准组及对照组(P<0.01);实验组大鼠的AI值明显高于标准组及对照组(P&

8、lt;0.01),见表1。表1各组大鼠膀胱的质量、MVD和AI(x