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《宁波区域金黄色葡萄球菌株肠毒素基因分布及特点探析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、宁波区域金黄色葡萄球菌株肠毒素基因分布及特点探析 金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）可导致皮肤、黏膜、深部组织和重要脏器的化脓性炎症，它的致病力主要取决于产生的各种毒素和侵袭性酶。肠毒素是金黄色葡萄球菌引起食物中毒的主要原因，具有超抗原特性，能够激活大量的具有强大杀伤力的T淋巴细胞，使其释放细胞因子。因此一直以来是研究的重点和热点。近年来陆续发现了十几种新的肠毒素基因，但是临床株所分泌的肠毒素基因95%以上为肠毒素A基因（S.aureusenterotoxingeneA,sea）、肠毒素B基因（S.aureusentero
2、toxingeneB,seb）、肠毒素C基因（S.aureusenterotoxingeneC,sec）、肠毒素D基因（S.aureusenterotoxingeneD,sed）[1-3].1998年Maiden等[4]在多位点酶电泳技术的基础上建立了多位点序列分型（multi-locussequencetyping,MLST）技术，并首次应用于脑膜炎奈瑟菌的分型研究。该技术以分析管家基因的序列多态性为基础，重复性好，试验数据全球共享，为分析金黄色葡萄球菌遗传相关性，探索菌株的起源和进化提供了巨大的信息资源。金黄色葡萄球菌广泛存在于自然界中，在医院
3、室内空气、各种物体表面以及医务人员手上均可检测到，对于儿童、老年人以及免疫力低下的烧伤或者透析患者具有极大的风险。在院内感染中金黄色葡萄球菌占有较大的比例，其检出率呈逐年增高态势[5].为了掌握宁波地区金黄色葡萄球菌临床株肠毒素基因分布和分子分型特点，为有效控制金黄色葡萄球菌感染提供实验室依据，特进行如下研究。 1材料与方法 1.1菌株2006、2008以及20112013年收集宁波市各医院从患者标本中分离的金黄色葡萄球菌菌株。标本来自重症监护病房（ICU）和烧伤病房患者静脉血、气管盥洗液、深静脉导管及创口脓性分泌物。2006年和2008年各收
4、集7株，2011年收集41株，2012年和2013年各收集50株，共收集155株。质控标准菌株为金黄色葡萄球菌（ATCC25923）,均为本研究室保存。菌株的鉴定方法包括VITEKⅡ生化鉴定系统（BioMerieux,France）. 1.2方法 1.2.14种肠毒素基因和MLST分型扩增引物sea、seb、sec和sed扩增引物见表1,MLST扩增和测序引物见 2结果 2.1金黄色葡萄球菌肠毒素基因检测结果155株菌株中，4种肠毒素基因总检出率为29.03%（45/155）,其中sea阳性株为26株（16.77%）,seb阳性株为9株（5
5、.81%）,sec阳性株为18株（11.61%）,sed阳性株为6株（3.87%）.45株菌株最多能同时检测出2种肠毒素，共出现8种肠毒素基因组合，sea（14株）、sec（9株）和sea+sec（8株）3种基因组合居于前3位。见表2. 2.2肠毒素基因阳性金黄色葡萄球菌MLST分型结果分析45株肠毒素基因阳性菌株可分为15个ST.ST1的菌株有14株，占31.11%;ST5的菌株有6株，占13.33%;ST1121和ST15的菌株均为4株，各占8.89%;ST188和ST239各3株，各占6.67%;ST6和ST59各2株，各占4.44%;其他
6、ST均只有1株菌株。从金黄色葡萄球菌MLST标准数据库中选择分离自中国患者和携带者的菌株作为参照，利用eBURSTV3软件绘制菌株ST分布图。数据库中参考菌株共有156株，分为137个ST.ST239的菌株有13株，占8.33%;ST88菌株有3株，占1.92%;ST5、ST241、ST865、ST1277和ST2184各2株，其他均只有1株。参考菌株分离时间为1998、20012002和20042012年，主要来自北京市（27株）、香港（19株）、四川省（15株）、江西省（14株）、安徽省（14株）和浙江省（14株）.201株中国临床株可分为11
7、个克隆群。最大克隆群为ST1克隆复合体，由45株菌株组成（22株宁波株和23株中国其他地区株）,存在1个一级亚群（ST188）和1个二级亚群（ST2201）.第二大克隆群为ST239克隆复合体，由35株菌株组成（4株宁波株和31株中国其他地区株）,并且是主要起源克隆群（SLV=15）.第三克隆群为ST5克隆群，由22株菌株组成（7株宁波株和15株中国其他地区株）.宁波肠毒素基因阳性临床株以ST1克隆群为最大克隆群（22株）,其次为ST5克隆群（7株）和ST239克隆群（4株）.与中国其他地区临床株比较，宁波肠毒素基因阳性临床株中出现了7个新的ST,
8、分别是ST59、ST12、ST1121、ST573、ST20、ST6和ST7.结果见图1. 2.3肠毒素基因阳性金黄色葡
