he┐ne激光照射对大鼠神经损伤后脊髓cgrp表达的影响

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1、He┐Ne激光照射对大鼠神经损伤后脊髓CGRP表达的影响　　摘要:目的研究10mETHODSInjuredsciaticnerves，madein96SDrats，munohistochemicallystudied.RE┐SULTSExpressionofCGRPincreasedinspinalcordonthefirstdayafterinjuryofsciaticnerve.Moreexpressionof　CGRPinsecondandfourthainlyfoundinmotorneuroninanteriorhorna

2、ndsensorynervefiberinposteriorhorn.Ateighthainedahighexpressioninbothgroups，andshootenerveregeneration.　　0引言　　He-Ne激光有广泛的生物学作用，动物实验和临床观察均证实激光照射有促进外周神经生长的作用［1］，其作用机制尚待探讨.降钙素基因相关肽（cal-citoningene-relatedpeptide，CGRP）是由37个氨基酸残基组成的神经多肽［2，3］，起着递质或细胞外调节物样作用，由降钙素基因家族编码，但化学结构、

3、体内分布及生物活性不同于降钙素，主要分布在神经系统中［4］，具有舒血管作用，在神经再生过程中起一定作用［5］.我们观察了He-Ne激光照射损伤大鼠坐骨神经后脊髓CGRP表达的变化.　　1材料和方法　　1.1动物模型及照射方法SD成年雄性大鼠96只，体质量（250±20）g，10gL-1戊巴比妥钠（30mgkg-1，ip）麻醉，常规消毒，取右侧股后外侧暴露坐骨神经，于神经分叉上0.7cm处眼科剪剪断，并修剪神经断端的覃状头，原位吻合以9个0的丝线缝合神经外膜4～6针，吻合后创口内放入庆大霉素2万单位关闭创口，对等分激光照射组和对照组各

4、48只处理.He-Ne激光器（西安产）波长632.8nm，激光照射组照射功率为10m，功率密度为35.39m-2，对准神经吻合处每次照射10min，照射能量密度为21.23Jcm-2，对照组做相同处理，激光照射功率输出为0mL，40gL-1多聚甲醛快速灌注200mL，缓慢滴注300mL，持续1.5～2h，而后取坐骨神经及相应脊髓，浸入200gL-1蔗糖液（0.01molL-1PB）4℃过夜，恒冷箱切片，片厚30μm.用0.01molL-1PBS清洗10min×3→浸入含3gL-1Triton×100的0.01molL-1PBS30m

5、in→0.01molL-1PBS清洗10min×3→加羊抗CGRP（12000，Sigma）4℃孵育48h，取出入0.01molL-1PBS清洗10min×3→加入兔抗羊抗体（1200，Sigma）室温孵育2h→入0.01molL-1PBS清10min×3→浸入ABC复合物（1500，Sigma）室温孵育2h，浸洗硫酸镍胺加强的DAB蓝色反应法显色、贴片、干燥、脱水、透明、中性树胶封片.应用LeicaQ570c真彩色图像分析仪（德国），进行灰度定量分析，每张切片在损伤侧后角的第3，4板层选5个高倍视野进行阳性物质密度值测定，取测定数

6、值减去背景测定数值的绝对值，t检验统计分析.　　图1－图2略　　2结果　　成年大鼠腰骶段脊髓中CGRP阳性反应的细胞数目较少，每一切面多为有1～2个CGRP阳性反应细胞，均为前角运动神经元，染色较淡，无明显阳性纤维，阳性反应细胞多为大细胞，呈圆形或多角形，树突较短，阳性物质主要集中在胞质，胞核为阴性.坐骨神经损伤后1d即发现损伤侧CGRP阳性反应增强，1的相干光，有广泛的生物学效应，作用于生物组织可使生物膜分子构象发生改变，改变膜受体结构，使细胞活性发生变化，有明显的生物学刺激作用［6］.神经修复是一个较为复杂的过程，外周神经元损伤

7、后可产生一系列的化学和组织学变化，一般认为，在这种变化中，与神经递质代谢有关的酶蛋白的合成下调，而与轴突存活和修复有关的结构蛋白的合成增加，如神经生长因子（NGF）［7］和生长相关蛋白（GAP-43）［8］的表达.外周轴突损伤后，可导致CGRP在运动神经元中含量增高，而He-Ne激光作为一种外界物理因子，通过其生物刺激作用使脊髓内CGRP表达增高.激光照射组2araSG，JonasV，RosenfeldMG，OngES，EvansRM.Al-ternativeRNAprocessingincalcitoningeneexpressi

8、ongeneratesmRNAsencodingdifferentpolypeptideproducts［J］.Nature，1982;298（5871）:240-244.［3］RosenfeldMG，MermondJJ，AmaraS