fish科技检验hterc基因及c

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1、FISH科技检验hTERC基因及C第一章前言在世界范围内，宫颈癌是严重威胁女性健康的主要恶性肿瘤之一，发病率居女性生殖系统恶性肿瘤的第二位，仅次于乳腺癌。全球每年约有53万的宫颈癌新发病例，其中80%发生在发展中国家[1]，原因是与发达国家相比，发展中国家在宫颈癌蹄查和预防方面有很大差距。近年来随着中国妇女宫颈癌蹄查工作的明显加快，使死亡率有所下降，但我国每年仍有13.2万宫颈癌新发病例，死亡病例约为3万[2]，且发病率有年轻化的趋势。宫颈癌的发生发展是一个连续渐进的过程，通常由CIM发展到浸润癌约需10?1

2、5年[3]。宫颈原位癌的5年生存率几乎达100%，而宫颈浸润癌约为67%。因此，如何进一步扩大蹄查面，提高蹄查质量及蹄查的特异性，敏感性与预测性，简化蹄查流程与方案是降低宫颈癌发病率及死亡率的关键。目前宫颈癌的常规蹄查主要是以宫颈脱落细胞学检查（TCT)为基础。数十年来，随着细胞学技术的应用和发展，宫颈病变相应地得到早期治疗，宫颈癌的发病率和死亡率得到了有效控制。但TCT检查主要依据细胞的形态学改变作为判断标准，与取材、制片及阅片人的经验及读片水平有很大关系。故TCT检查存在敏感度低、不明意义涂片结果较多等不

3、足。HPV是目前宫颈癌蹄查中常用的辅助手段，敏感性高，但特异性及阳性预测值较低，且大部分妇女感染HPV是一过性的，尤其是性生活活跃的女性。上述检查均不能预测宫颈病变的进展情况。因此，有必要寻找其他可靠的指标或手段来协助上述检查进行综合判断，使宫颈癌的早期蹄查更可靠，更准确及更有预见性现代分子生物学及细胞遗传学研究表明，在大多数肿瘤细胞中，特别是实体肿瘤细胞，常表现有染色体的不稳定性,包括染色体数目的改变及染色体结构的异常。美国NIH研究发现，宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌的转变过程中几乎都伴有3号染色体长

4、臂的扩增。亦有研究表明，宫颈癌染色体的不稳定性常表现为3q的增加和2、3、4、6p，llq的缺失,并且异常基因区多位于3q26.1~q28[4，5]，人类染色体末端酶基因(hTERC基因，位于3q26.3：)正位于此区域，可能是有重要意义的紀基因。该基因的扩增可阻止细胞调亡，导致肿瘤产生。C-MYC基因属核内转录因子原癌基因，是myc癌基因家族中的重要成员之一。其表达蛋白定位于细胞核内，具有与染色体DNA结合的特性，能促进与细胞增生有关癌基因的开放，其扩增与高表达不仅能促进细胞的恶性转化与增殖，而且可以抑制细

5、胞分化，并参与细胞的凋亡过程，在调节细胞恶性转化及增殖中发挥着重要作用。C-MYC基因定位于8q24，该基因的扩增与表达增加常见于多种癌症。最新针对宫颈癌及癌前病变标本中C-MYC基因的研究结果显示C-MYC扩增是宫颈癌发生发展的重要指标之一，该基因扩增异常，提示该患者很可能已经存在宫颈癌前病变，甚至是宫颈癌，需要及时进行进一步检测来判断病情。荧光原位杂交技术（fluorescenceinsituhybridization，FISH)是近年来发展起来的以分子生物学、细胞遗传学及免疫学技术相结合的非放射性原位杂

6、交技术。其按照碱基互补的原则，采用荧光标记的探针与被检测样本中的DNA杂交，通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果。因其具有无创、高敏感性、特异性及稳定性好等特点，且不需要细胞培养，从一定程度上弥补现行宫颈癌蹄查方法的局限性，可作为临床宫颈病变蹄查的一项重要辅助检查。本研究采用FISH技术检测hTERC基因，C-MYC基因在不同宫颈病变脱落细胞中的异常扩增情况，探讨其在宫颈癌发生发展中的作用，为hTERC基因，C-MYC基因在宫颈癌蹄查中的临床应用价值提供实验依据。第二章材料与方法2.1临床资料随机收集2010

7、年11月至2011年5月于中南大学湘雅二医院妇产科门诊就诊的1000例患者的宫颈脱落细胞标本。每一份标本同时进行液基细胞学检查，hTERC基因（FISH检测）及C-MYC基因（FISH检测）检测，对所有液基细胞学，hTERC基因及C-MYC基因检测任一指标阳性的患者行阴道镜下病理组织多点活检，以病理学结果为金标准。选择其中均进行了宫颈液基细胞学，hTERC基因，C-MYC基因检测及有组织病理学结果的病例进行分析。其中组织病理学正常/炎症120例，CINI30例，CINII24例，CINIII21例及宫颈癌18

8、例，共计213例。2.1.1入选标准中南大学湘雅二医院妇产科门诊就诊者及机会蹄查者，年龄范围为25~64岁，所有病例均未接受任何宫颈治疗（即宫颈物理或手术治疗）。2.1.2排除标准(1)在本院或外院已做过阴道镜活检者；(2)已经确诊为CIN者；(3)已经治疗过的病例；(4)急性生殖道炎症及妊娠者；所有研究对象入组前均向其详细解释知情同意书的内容及相关情况，均在了解本研究的获益及风险后，方签署知情同意