法医学检验及鉴定对原癌基因c

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1、法医学检验及鉴定对原癌基因c-->法医学检验及鉴定对原癌基因c-fos的意义[摘要]目的研究原癌基因c-fos的表达与肌肉挫伤的关系。方法50只SD大鼠随机的分为实验组和对照组,用免疫组化SP法观察大鼠肌肉挫伤后c-fos蛋白表达。结果随着损伤经过时间的延长,c-fos蛋白表达强度以及阳性面积增加,损伤后15min出现阳性信号,1h达到高峰,1d后恢复正常表达水平。结论原癌基因c-fos表达的检测可作为推断肌肉挫伤时间的指标之一。[关键词]肌肉挫伤c-fos免疫组织化学损伤时间Abstract:ObjectiveTostudytherela

2、tionshipbetusclecontusionofrats,andtosearchforasensitivemarkeroftimingforskeletonmusclecontusion.MethodsFittySprague-Dalydistributedintocontrolgroupandexperimentalgroups.Theexpressionofc-fosicroscopicallyobservedbyimmunohistochemicalmethod.Resultsarmarou自由落体装置,用450g铁锤自1.3m

3、高度垂直落下,打击大鼠左后肢股四头肌部位,造成肌肉挫伤,此时肌肉仍保持完整,挫伤灶局限在一定范围,实验组动物在打击后按预先分组时间断颈处死,取左后肢挫伤灶边缘3mm处肌肉,标本大小为1cm×0.4cm,厚度为4mm,立即用4%多聚甲醛液固定24～36h,常规脱水透明浸蜡及包埋切片,切片厚度4μm,进行HE及免疫组织化学染色,正常对照组动物后肢剪毛备皮后不致伤,其余处理同损伤组。1.4染色方法HE染色:采用常规HE染色方法免疫组化染色:采用SP法,按说明书操作进行。一抗工作浓度为1∶100。采用PBS代替一抗做阴性对照。1.5结果判定及图像分

4、析结果判定是以肌肉细胞胞浆中的棕色颗粒为阳性信号,图像分析检测数据用均数±标准差表示。灰度值越高,阳性信号越弱,灰度值越低,阳性信号越强。面积越大,阳性表达越多,面积越小,阳性表达越少。统计学处理应用SPSSforin及30min组挫伤缘肌细胞广泛断裂,胞浆淡染,细胞水肿,细胞间隙增大。损伤后1～3h组部分肌束内肌细胞间完全分离,细胞间质水肿明显,血管周围炎细胞渗出。损伤后6h～1d组见挫伤缘炎细胞浸润明显,正常肌肉肌细胞间质水肿明显,大量肌束内肌细胞间完全分离。损伤后3d和5d组见肌束内肌细胞间隙开始减小。而正常对照组大鼠肌肉肌束丰富,肌

5、束间为血管及神经走行,肌束膜间可见少量散在成纤维细胞及巨噬细胞分布,肌束内的肌细胞间排列紧密。2.2肌肉挫伤后免疫组织化学染色结果对照组未见阳性信号(图1,见封底)。c-fos在大鼠挫伤实验组中的表达呈现一定的规律性。c-fos在大鼠肌肉挫伤后15min开始出现阳性表达(图2,见封底),随损伤时间的延长阳性反应范围逐渐扩大,阳性信号的强度逐渐增强,伤后30min,表达已相当明显(图3,见封底);伤后1h达到高峰(图4,见封底),然后开始下降,1d后逐渐恢复到正常表达水平(表1)。3讨论3.1肌肉-->挫伤模型的选择及比较本实验采用陈晓刚[2

6、]改进后MarmarouA自由落体打击大鼠颅骨致颅脑损伤模型,将其应用于大鼠肌肉挫伤模型的建立。自由落体打击法影响模型的因素较多,如技术熟练程度不同,动物固定不良致打击部位不一致,重锤打击受力面的形状与接触部位面积大小不同等情况,都可影响模型的重复性。在本实验中,通过重锤打击建立的该肌肉挫伤模型,打击力可定量,而且因大鼠大腿致伤部位面积较大,接触面平整,其损伤的可重复性较好,损伤程度和部位均较为一致,在肌肉挫伤模型的复制中本方法效果较理想,准确且简便易行。3.2大鼠肌肉挫伤c-fos表达变化规律及意义c-fos是一种细胞原癌基因,人类c-f

7、os基因定位于染色体14q21-31上,是一段3.5kb的DNA,由4个外显子和3个内含子组成。c-fos编码2.2kb的成熟mRNA,该mRNA编码一个由380个氨基酸组成的分子量为55kD的磷蛋白,Fos与c-Jun原癌基因编码的蛋白质Jun通过亮氨酸拉链(LZ)形成Fos-Jun异源性二聚体AP-1[3]。AP-1与靶基因启动子中的AP-1位点结合调控其转录,指导合成相应的蛋白质,从而对外界刺激做出应答。以往的研究表明,c-fos蛋白对细胞有保护作用,参与了损伤的愈合过程[4,5],骨骼肌挫伤后,可以进行再生并发生修复[6]。因此可以

8、认为,肌肉挫伤后,c-fos基因的表达,对骨骼肌细胞具有保护作用,参与了骨骼肌损伤的病理生理过程。本研究表明,大鼠肌肉挫伤后早期,c-fos蛋白呈阳性表达,说明骨骼肌组织受刺激后