卒中后抑郁患者载脂蛋白e与认知功能的相关研究

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1、卒中后抑郁患者载脂蛋白E与认知功能的相关研宄李静郑振雨肖博李素芳(通讯作者)(河南省新乡市新乡医学院第三附属医院453003)目的了解卒中后抑郁(PSD)患者载脂蛋白E(ApoE)水平和认知功能特点，为PSD的临床诊断提供新的客观依据。方法1.采用事件相关电位P300作为认知功能的评定指标。2.采用实时荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附法(ELISA)检测ApoE水平。结果1.事件相关电位(ERP)测定卒中后抑郁组N2及P3波潜伏期较卒中组和对照组延长(P<0.01),P3波幅降低(P<0.01)o2.PSD组血清ApoE水

2、平高于卒中组(P<0.05)<,3.卒中后抑郁组ApoE基因mRNA表达量低于卒中组(P<0.01)。结论卒中后抑郁患者事件相关电位P300结合载脂蛋白E水平可以作为临床诊断参考指标。【关键词】卒中fo抑郁载脂蛋白E认知功能PSD是脑卒中的常见并发症之一，临床上主要表现为情绪低落、兴趣减退、思维迟滞等，伴有认知功能的损害。研宄证实血脂代谢的异常是导致脑卒中和抑郁症的重要因素，而ApoE可以调节血脂代谢。也有研究表明载脂蛋白E与脑血管性疾病相关，是脑卒中的危险因素［1］，同时ApoE基因与血管疾病患者的抑郁情绪有关。因此我们

3、推测ApoE影响PSD的发生。近期研究发现ApoE是阿尔茨海默病的主要危险因素，可能成为认知功能障碍的诊断指标［2］。木研究旨在研究PSD患者ApoE和血清血脂水平特点，期望为PSD临床诊疗提供新的客观依据。1.材料与方法1.1研宄对象木研宄选取2009年1月至2012年12月期间新乡医学院第三附属医院患者67例，选取健康志愿者作为对照组。按全国第四届脑血管病学术会议脑梗死诊断标准，采用24项汉密尔顿抑郁量表分为卒中后抑郁组28例，年龄43〜76岁，平均(64.28±8.73)岁。文化程度:大学7例，中学10例，小学11

4、例。单纯脑卒中组39例，年龄43〜78岁，平均(64.57±11.6)岁。文化程度：大学6例，中学20例，小学12例。对照组40例，年龄42〜78岁，平均(57.30±10.68)岁，文化程度：大学24例，中学12例，小学4例，既往无高血压病史、心血管病史及糖尿病病史。对照组与各病例组之间在性别、年龄和文化程度等方面差异均无统计学意义(P均>0.05)。1.2试剂和仪器DNA/RNAisolationKit、M-MLVReverseTranscriptase反转录酶/dNTP、DNase/RNase-

5、free去离子水/三氯甲烷、无水乙醇/?-巯基乙醇、人载脂蛋白E基因引物，HVE-5高压火菌器，生物安全柜BSC-1500IIB2-Z,隔水式电热恒温培养箱PYX-DHS-40X50-BS-II,数字显示式恒温水温箱，EppendorfCentrifuge5415D离心机，高速冷冻离心机，FTC-2000荧光定量基因扩增仪，Tu-1900双光束紫外可见分光光度计，全自动洗板机4MK2/酶标仪MK3。1.3实验方法1.3.1认知功能测定脑卒中后抑郁组和卒中组患者均采用诱发电位仪测定认知功能。受试者保持清醒状态及精神集中，全身肌肉放松，实

6、验采用短音刺激，非靶刺激(频率为1000Hz),强度为80dB,概率为80%,规律出现。靶刺激(频率为4000Hz),强度为90dB，概率为20%，随机出现并穿插于非靶刺激中，受试者需对靶刺激作按键反应，仪器自动记录反应时间及命中率，每例重复两次后取平均值。异常标准判定：以正常组为参照，N2、P3潜伏期延长和/或P3波幅降低，Jt•数值超过正常对照组的2.5个标准差为异常，对照组认知功能测定在同期进行。ApoE基因mRNA表达量测定采用PCR检测ApoE基因mRNA表达量。人载脂蛋白E基因引物序列如下:上游引物为5′-GG

7、GTCGCTTTTGGGATTACCTG-3′,下游引物为5′-CAACTCCTTCATGGTCTCGTCC-3′；GAPDH基因作为内参照，上游引物为5’-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3’，下游引物为5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’。按RNA提取试剂盒说明书中的操作步骤提取总RNA后逆转录为cDNA。逆转录反应体系为：M-MLV5ΧReactionBuffer(5μl)，普通型dNTP(1.25μ

8、l),M-MLVRT(lμl)，Nuclease-FreeWater(1.75μl)。实时荧光定量PCR,25μl的反应体系内容如下：SYBRII(12.5μl),上、下游引物各(lμl),