结核分支杆菌核酸适配体研究进展

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1、动物医学进展，２０１４，３５（１２）：１２２－１２６ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ结核分支杆菌核酸适配体研究进展杨倩１，王全凯１，４，宋战昀２＊，李敏思３，张健１，王振国２（１．吉林农业大学，吉林长春１３０１１８；２．吉林出入境检验检疫局，吉林长春１３００６２；３．甘肃农业大学，甘肃兰州７３００７０；４．吉林省中韩动物科学研究院，吉林长春１３０６００）摘要：结核分支杆菌（ＭＴＢ）是引起多种宿主感染结核病的重要病原菌，由于结核分支杆菌耐药菌株的产生，导致结核病在世界范围内呈高发趋势。由于ＭＴＢ检出率较低，开

2、发一种简单快速的诊断方法迫在眉睫。指数富集配体系统进化技术（ＳＥＬＥＸ）的原理是从随机寡核苷酸文库中筛选到能特异性结合靶物质的寡核苷酸配体（称为适配体）。论文对近几年国内外通过ＳＥＬＥＸ技术对结核分支杆菌筛选出的适配体做一综述，适配体的靶物质分别为分泌蛋白ＭＰＴ６４，ＣＦＰ１０－ＥＳＡＴ６蛋白，多磷酸激酶２（ＰＰＫ２）以及结核分支杆菌（Ｈ３７Ｒｖ株）整个菌体。体外筛选的结核分支杆菌适配体，能对结核病做出早期诊断，并能作为ＭＴＢ疫苗的免疫佐剂，在临床诊断及药物研究等方面有很大应用前景。关键词：结核分支杆菌；适配体；ＭＰＴ６４蛋白；Ｃ

3、ＦＰ１０－ＥＳＡＴ６蛋白；多磷酸激酶２；Ｈ３７Ｒｖ菌株中图分类号：Ｓ８５５．３文献标识码：Ａ文章编号：１００７－５０３８（２０１４）１２－０１２２－０５结核病是一种人兽共患的慢性传染病，是由结作用的靶物质的表位相结合，有封阻这类靶分子的核分支杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，ＭＴＢ）引功能，从而达到缓解和治疗的目的。因此，理论上适起的影响人类健康的重大疾病。近年来，随着人口配体可被用于诊断及治疗因有害基因的表达而引起流动、结核病伴发艾滋病及结核分支杆菌耐药菌株的疾病，如细菌感染等。的产生，致使结核病在世界范

4、围内又呈高发趋势。近年来，人们利用酶联免疫法与ＳＥＬＥＸ技术全球约有１／３的人口是ＭＴＢ的携带者，每年有大相结合，筛选针对标志物的适配体，用于诊断和鉴别约２百万人死于结核病，同时每分钟又有１５人被感结核病，其检测敏感性及准确率明显高于传统的涂［１］染。目前，由于ＭＴＢ的检出率较低，导致控制结片方法，并可明显提高结核病的阳性检出率，尤其适核病成为一大难题。ＭＴＢ对哺乳类宿主主要是通用于菌阴肺结核（涂片和培养均为阴性结果的肺结过气溶胶途径致病。因此，我们迫切地需要开发一核）及肺外结核病（ＭＴＢ侵染肠道、扁桃体、皮肤等种诊断ＭＴＢ的简单

5、而又快速的方法。器官后，引起相应的淋巴结结核，不易取得细菌学检［２］［４］ＴｕｅｒｋＣ等首次提出指数富集配体系统进化查标本）的诊断和鉴别。目前，国内外研究者已经技术（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｌｉｇａｎｄｓｂｙｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ成功筛选到结核分支杆菌适配体，与其相互作用的ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ，ＳＥＬＥＸ），此后人们对核酸的研究进入目标靶物质分别为结核分支杆菌的分泌蛋白６４了新阶段。利用该技术从特定的随机寡核苷酸库中（ＭＰＴ６４），ＣＦＰ１０－ＥＳＡＴ６蛋白（短期培养滤液蛋筛选出的，能与目标靶物质特异性相互作用的

6、寡核白－１０：ｃｕｌｔｕｒｅｆｉｌｔｒａｔｅｐｒｏｔｅｉｎ－１０，ＣＦＰ－１０和早期分苷酸配体叫做适配体（ａｐｔａｍｅｒ）。适配体具有体外泌蛋白靶６０００蛋白：ｅａｒｌｙｓｅｃｒｅｔａｒｙａｎｔｉｇｅｎｉｃｔａｒｇｅｔ人工合成，不受免疫原性和免疫条件限制，变性与复６ｋｕｐｒｏｔｅｉｎ，ＥＳＡＴ－６），多磷酸激酶２（ＰＰＫ２）及结［５］性可逆，可定量检测，高特异性，高亲和力，高敏感性核分支杆菌（Ｈ３７Ｒｖ株）整个菌体。这些适配体［３］及其作用的靶分子范围极广等特点。在检测抗原的成功筛选，为进一步利用适配体进行结核病的诊方面，适配体已

7、逐渐取代抗体，并在一定程度上弥补断打下了良好基础。本文对上述通过ＳＥＬＥＸ技术了抗体在诊断应用中的不足。不仅如此，适配体还筛选获得的结核分支杆菌适配体的国内外研究进展可以作为拮抗剂，特异地与疾病发生过程中起重要做一综述。收稿日期：２０１４－０４－２８基金项目：国家自然科学基金项目（３１００１０６５）；国家质检总局科技计划项目（２０１３ＩＫ０３３）；国家国际科技合作专项项目（２０１１ＤＦＡ３２９００）作者简介：杨倩（１９８７－），女，吉林长春人，硕士研究生，主要从事动物病毒学研究。＊通讯作者杨倩等：结核分支杆菌核酸适配体研究进展１２

8、３１针对结核分支杆菌的ＭＰＴ６４蛋白筛选出用适配体检测体系进行结核病的早期实验室诊断奠的适配体定了基础。１．２适配体ｍｐｔ６４ｋｔａＭＰＴ６４核酸适配体是针对结核分支杆菌筛选出来［１２］蔡江丽等利用ＳＥＬＥＸ技术筛选ＭＰＴ６４抗的适配体中最早提出来