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1、·74·中国媒介生物学及控制杂志2005年2月第16卷第1期 ChinJVectorBiol&Control,February2005,Vol.16,No.1·综述·结核分支杆菌蛋白抗原研究进展3#高源,万康林3 结核分支杆菌(Mycobacteriumtuberculosis),俗称结核杆多肽区带,相对分子质量约为45×10。〔2,3〕菌,是引起结核病的病原菌。结核分支杆菌可侵犯全身各器1.2膜蛋白分析(脂蛋白成分)针对结核分支杆菌菌膜官,引起全身多系统多器官的疾病,但以肺结核最为多见。结蛋白以脂蛋白成分为主,而结核菌以寄主巨嗜细胞为主的特核分支杆菌可以在寄主巨
2、噬细胞吞噬后仍然生存,并且通过外点,有人怀疑菌膜的脂蛋白可能刺激免疫系统产生相应的++排的分泌蛋白与机体免疫系统产生反应,导致病理反应,不易CD4/8T细胞,因此利用差速离心的方式及柱层析法对脂蛋杀灭,且少量的结核分支杆菌可形成潜伏期病灶,以休眠状态白成分进行了分析,且得到了较为主要的3种脂蛋白成分,但相结核分支杆菌或L型菌形式在宿主体内长期生存,在一定条件关的研究报道较少,对于脂蛋白在临床诊断及相关方面的应用下又可以恢复为具有抗酸性的原生结核杆菌,从而导致结核病尚不十分明了。〔4〕的发生。尽管近年来许多研究者纷纷从基因角度进行相关研1.3分泌蛋白分析分泌蛋白的研究
3、在目前是较为热门的究,并取得了显著成绩,但正如许多研究者所言,无论是解决结一个方面,有研究表明,众多有意义的蛋白抗原多为分泌性抗核病的特异、快速诊断方法、研究结核杆菌的致病机理,还是在原,常用的分析方法为短期滤液培养法,及有针对性地将编码开发研制结核新疫苗上获得突破,都需要对结核杆菌进行基础相应蛋白的基因进行重组表达。有相关文献显示,目前报道的性和探索性的蛋白抗原研究。因此,近年来结核杆菌的蛋白抗分泌蛋白多达几十种,开展相关深入研究的有十几种,多数研原研究也得到了迅速发展。究集中在MPT32、MPT44、MPT45、MPT51、MPT53、MPT59、MPT63、M
4、PT64以及EAST26等少数可产生显著免1 结核杆菌的蛋白抗原研究概况疫反应的蛋白上。1.1全菌菌体蛋白质分析 分析比较结核分支杆菌与其他分2 结核杆菌蛋白抗原研究的技术方法支杆菌菌体多肽抗原的共性和个性,寻找与结核病诊断及其他应用相关的多肽抗原仍然是结核分支杆菌蛋白抗原研究及多2.1细胞破碎技术 主要分为化学方法和物理方法2种,物抗单抗研究的基础。相关的文献研究表明〔1〕,13种分支杆菌多理方法常使用超声破碎法,低温高压破碎法和反复冻融的方肽成分经SDS2PAGE和考马斯亮蓝R2250染色后,菌体多肽成法;化学方法主要是使用如Tris、SDS、β2巯基乙醇、DT
5、T等有机分可按相对分子质量的大小分成35～40条区带。区带分析表溶剂对细胞进行裂解,在实际应用中2种方法常共同使用。〔4〕明,结核分支杆菌H37Rv和H37Ra株菌体多肽成分基本上一2.2蛋白分离及纯化技术蛋白质的分离纯化技术有许多致。牛BCG和Bovis株菌体多肽成分也基本上一致,主要多肽种,按分离机制的不同可以分为以下几类:成分相对分子质量为76×103、65×103、(45～60)×103、(30～2.2.1 色层分析法 简称层析法(chromatography),也称色谱43)×103、(26～28)×103、25×103、16×103等。结核分支杆菌法,一
6、般指待分离体(流动相,mobilephase)经过一个固态物质和牛结核分支杆菌菌体多肽除1条区带外,基本相似。这条区(固体相,solidphase;基质,matrix)后所发生的组分分布变化。带的区别在于:结核分支杆菌多肽区带相对分子质量为混合物中各组分理化性质的差别(如分子形状和大小、分子极28×103,而牛结核分支杆菌为27×103。SDS2PAGE分析还发性及分子亲和力等)使它们以不同程度分布在两个相中,从而现,在结核分支杆菌、牛结核分支杆菌毒株与减毒株之间,相对以不同程度相对于固相移动而达到分离。与其他经典分离方分子质量为28×103和27×103,多肽成分
7、有所差别。结核分支法(蒸馏、结晶和萃取等)相比,层析法操作简便,分离效率高,不杆菌减毒株这一多肽成分相对分子质量为25×103,牛结核分支仅用于一般化合物的定性定量分析,也广泛用于生物大分子杆菌减毒株为24×103,都相应低于毒株这一成分的相对分子质(蛋白质、酶、核酸、多糖和多肽)、生物初级代谢产物(如氨基酸、量。其余分支杆菌多肽区带差异较大,随菌种的不同,各自区核苷酸、脂肪酸和有机酸)及次级代谢产物(核苷、色素和生物带不同。鸟型分支杆菌主要多肽相对分子质量为(28～碱)等的分离和纯化。层析技术与电泳技术同为生物大分子的40)×103、65×103、16×103
