市售菌的分离鉴定大实验报告

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1、《微生物学大实验》市售食品中腐败菌的分离纯化及其生物学性状的观察姓名：刘晓雪班级：食品科学与工程2班指导教师：关桦楠同组人：陆婧婧、姜磊、贾玲、隋颖、李虹颖、张凯实验报告成绩：一、前言食品腐败变质是指食品受到各种内外因素（例如温度，气体等）的影响，造成其原有物理性质或化学性质发生变化，降低或失去其营养价值和商品价值的过程。食品腐败变质的过程实质上是食品中碳水化合物、蛋白质、脂肪在污染微生物的作用下分界变化、产生有害物质的过程。本次实验以鱼排为材料，它里面含有碳水化合物、蛋白质、无机酸、维生素、有机酸和大量的

2、水分PH一般偏向酸性（4.5—7.0）这些条件都很适合微生物的生长繁殖。这些微生物大部分是嗜酸性微生物即霉菌、酵母菌和某些细菌。我们运用营养琼脂培养基、麦芽汁培养基、马铃薯培养基、平板划线、点植、涂布等方法从中分离出腐败菌，观察和分析其菌种及菌落形态。食品中腐败菌的主要是大肠菌群，大肠菌群是人及动物肠道中的正常寄居菌，食物或水中大肠菌群的检出意味着直接或间接的近期粪便污染。大肠菌群作为饮水、食品等的粪源性污染卫生细菌学指标，而且在外界存活时间与一些肠道病原菌相似，它的出现可能意味着某种肠道病原菌如沙门氏菌、

3、志贺氏菌的存在。大肠菌群是国际上公认的卫生监测指标，因此大肠菌群的检测技术十分重要。二、实验材料药品和仪器2.1实验材料市售食品鱼排在18℃—22℃，湿度为59%，放置3-4个星期2.2实验药品营养琼脂培养基、马铃薯培养基、麦芽汁培养基和乳糖胆盐培养基；葡萄糖糖发酵试剂盒、乳糖糖发酵试剂盒、麦芽糖糖发酵试剂盒和蔗糖糖发酵试剂盒；无菌水、番红、结晶紫、酒精、碘液、美蓝。2.3仪器设备显微镜、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、冰箱、电磁炉等、烧杯、量筒、大试管、小试管、锥形瓶、培养皿、无菌移液管、酒精灯、

4、接种环、天平、胶塞、胶头滴管、报纸、皮筋、标签等。三、实验方法3.1食品中腐败菌的分离（1）将市售食品鱼排1-2g（自行定量，饮料样品可直接使用）捣碎并置于100mL无菌水中，充分震荡制成混悬样品液。（2）培养基的制备：营养琼脂培养基：称取4.5g营养琼脂粉，加入100mL水加热溶解，分装，在121℃下蒸汽灭菌。20min后取出导入无菌平皿中冷却凝固。马铃薯培养基：将去皮土豆200g切成2cm左右小块加入1000mL水煮沸10min，过滤补充水份，加入20g琼脂粉，20g葡萄糖，加热溶化，分装，121℃下蒸

5、汽灭菌20min。麦芽汁培养基：称取5g麦芽粉加入100mL和2g琼脂，在121℃下蒸汽灭菌20min。（3）采用平板划线法分离细菌（营养琼脂培养基）：将混合菌分离样品摇匀，接种环火焰灭菌后，在火焰边取出试管塞，火焰灭菌后至少凉4秒，再将接种环插入样品试管中，取出样品，并将试管塞塞紧，左手掀开皿盖，右手持接种环，自皿的一边开始轻轻的来回划线。（4）采用涂布法分离酵母菌（麦芽汁培养基）：取少量样品液（不超过0.1mL）滴加到培养基表面。将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s，用涂布器

6、将样品液均匀地涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。（5）采用点植法分离霉菌（马铃薯培养基）：接菌环轻微接触食品腐烂处，然后点植在培养基表面，一般点6个点。（6）把不同类型的培养基放入到培养箱中，28-30℃倒置培养。3.2腐败菌的生物学性状初步鉴定（1）腐败菌中细菌的观察鉴定（革兰氏染色法）：在载玻片中间滴一滴生理盐水，点燃酒精灯，接种环在酒精灯附近灭菌，后在营养琼脂培养基上取样，均匀涂片。固定时通过火焰1-2次，不可过热，以载玻片不烫手为宜。滴加初染液草酸铵结晶紫1滴，约1min后，水洗

7、。加碘液媒染1min，并覆盖约一分钟，水洗。95%酒精脱色处理，观察流出液的颜色，衬以白色背景，无色时，脱色终止，马上水洗并吸干。加番红复染1-2min，水洗。镜检油镜观察，革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色，以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。（2）腐败菌中酵母菌的观察鉴定在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液，按无菌操作法在营养琼脂培养基上取培养48小时的菌种少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。用镊子夹盖玻片一块，小心的盖在液滴上，该片时应注意，不能

8、将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免长生气泡。将制好的水浸片，放置3min后镜检。（3）腐败菌中霉菌的观察鉴定在载玻片中央滴加一滴乳酸酚用针挑取菌落周边放在乳酸酚中搅拌匀,盖上薄片，至于显微镜观察.在载玻片中央加一染色液或水于洁净载玻片上，打开霉菌平板培养物，用接种针从菌落的边缘挑取少量带有孢子的菌丝，放入载玻片的染液中，细心地把菌丝挑散开，加盖玻片，注意不要产生