市售乳酸菌的分离

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1、市售酸奶中乳酸菌的分离与纯化（保加利亚乳酸杆菌和嗜热链球菌）l乳酸菌的相关特性（1）乳酸杆菌（保加利亚乳酸杆菌）厌氧或者微好氧，在45摄氏度甚至50摄氏度时生长，最是生长温度是40到43摄氏度，比产酸温度低2到8度，不适宜再酸性环境下生长，否则会发生分裂或自溶。最适PH值5.5.（2）嗜热链球菌最适生长温度35到42摄氏度，比产酸温度低2到8度，最适PH值7.4（3）保加利亚乳酸杆菌和嗜热链球菌的相互作用再43摄氏度培养时，由于巴加利亚乳酸杆菌产酸的量和产酸的速度增快，球菌开始停止生长，而在发酵完成后，随着保存时间的增长，酸度增加，杆菌的耐酸性不如球菌，致使杆球比严重失调。但是在低氧或者无氧

2、的条件下，嗜热链球菌能够产生一些促进保加利亚乳酸杆菌生长的化合物，而报及利亚乳酸杆菌的发酵乳中的无菌过滤物可促进嗜热俩球菌的生长。l乳酸菌的分类1、乳杆菌属（Lactobacillus）形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状,一般成链状排列运动性：通常不运动，有的能够运动,具有周生鞭毛。营养类型：化能异氧型需氧情况：微好氧性2、链球菌属（Streptococcus）形态：细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列运动性：一般不远动营养类型：化能异养型需氧情况：兼性厌氧型3、明串珠菌属（Leuconostoc）形态：细胞球形或豆状，成对或成链排列运行性：不运动营养类型：化能异养型需氧情况：兼性厌氧型4

3、、双歧杆菌属（Bifidobacterium）形态：细胞呈多样形态：Y字形、V字形、弯曲状、勺形，典形形态为分叉杆菌运行性：不运动营养类型：化能异养型需氧情况：专性厌氧5、片球菌属（Pediococcus）形态：细胞球形，成对或四联状排列运行性：不运动营养类型：化能异养型需氧情况：兼性厌氧l乳酸菌的筛选一、乳酸菌的分布乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧的化能营养菌。生长繁殖于厌氧或微好氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体如下：（1）与动物相关分布：乳汁、消化道、粪便等；（2）与植物相关分布：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部位等；（3）发酵食品：泡菜、酱油、发酵肉制品等；（4）乳酸饮料：酸

4、奶等。二、筛选方法（一）溶钙圈法利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。1、乳酸菌筛选培养基（MRS培养基）配方（1L）:蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母提取物5.0g，K2HPO42.0g，柠檬酸三铵2.0g，乙酸钠5.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，MgSO4·7H2O0.5g，MnSO4·4H2O0.25g配制：1.调PH至6.2～6.4；2.称取20gCaCO3加入到100mL蒸馏水中，制成CaCO3乳

5、浊液；3.将MRS培养基和CaCO3乳浊液分开灭菌；4.倒平板前，待培养基融化冷却后，平板上加入一定量的CaCO3乳浊液，晾干了以后再接种。2、筛选过程样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。（二）溴甲酚绿指示剂法1、培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液）或BCG牛乳培养基成分：MRS培养基：同上BCG牛乳培养基：（A）液：脱脂奶粉10克，水50ml，加入1.6%溴甲酚绿乙醇溶液1ml，80℃灭菌20min。（B）液：酵母膏1克，水5

6、0克，琼脂2克，pH6.8，121℃灭菌20.min。按照配方正确称取所需药品放于烧杯中，在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解，用1NNaOH或1NHCl调pH，用pH试纸对照，加琼脂溶化，加热过程要不断搅拌，可适当补水。琼脂完全溶解后倒入250mL的锥形瓶中，用纱布包扎好（注意不要污染纱布）再用牛皮纸包扎，贴上标签（必须用铅笔写），注明何种培养基。在高压锅中，在1kg/cm2压力下维持30min。2、筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长出菌落，挑取使溴甲酚绿变色的菌落。l培养基（保加利亚乳酸杆菌和嗜热链球菌）(1)嗜热链球菌样品来源：市售酸奶培养基：M17改良培养基培养基成分：植物

7、蛋白胨5g，酵母粉5g，聚蛋白胨5g，抗坏血酸0.5g，牛肉膏2.5g，MgSO4  7H2O0.01g，ß-甘油磷酸二钠19g，蒸馏水1000mL，121℃灭菌15min。培养温度：42℃需氧情况：兼性厌氧筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离（2）保加利亚乳杆菌样品来源：市售酸奶培养基：牛肉浸膏1.5％，酵母浸膏0.5％，葡萄糖3.0％，柠檬酸三铵0.2％，七水硫酸镁0.02％，琼脂1.5％，pH