乳酸菌的分离培养.doc

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1、乳酸菌的分离培养保加利亚乳杆菌组长：组员：实验目的：1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术及微生物形态观察；2.学习微生物制片、染色的基本技术，掌握乳酸菌的简单染色法及无菌操作接种技术；3.通过对培养基的配制，了解配制培养基的一般步骤和方法，掌握微生物实验常用的器皿的清洗与包扎、培养基的制备、消毒灭菌。4.了解各种灭菌的基本原理和应用范围，以及实验室中常用的灭菌方法。5.了解酸奶中乳酸菌分离原理,观察乳酸菌的基本形态,掌握用显微镜测微尺测量微生物细胞大小、数目的测定的方法。6.了解稀释平板计数的原理

2、，熟练掌握混合平板培养法。明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。7．初步学会乳酸菌培养的基本技术，了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法，掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。8.了解并掌握微生物菌种保藏的常用方法及其优缺点，并了解不同微生物对不同的生物大分子的分解利用情况，认识微生物代谢类型的多样性。实验原理：乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，本实验中用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同,脱色效果不同从而

3、可以将细菌区分为G+和G-菌。通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌应为乳杆菌和乳球菌的混合体。酸奶中含有乳酸菌，而且目前市场上销售的酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。细菌及其它一些微生物的大小，通常用测微计来测量，测微计分接目测微计与镜台测微计；培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组份的营养物质调制而成的营养基质；灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物，包括芽孢；自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往

4、是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。实验器材：样品：含乳酸菌的酸奶①培养基：改良MRS固体培养基蛋白胨5g牛肉膏5g酵母提取物2.5g柠檬酸二铵1g水500mL乙酸钠2.5gK2HPO41gMnSO4·4H2O0.125吐温800.5mL琼脂12.5gMgSO4·7H2O0.

5、29gCaCO35g葡萄糖10g。仪器用品：500ml烧杯一个100ml量筒一个无菌培养皿12个250ml容量三角瓶2个5ml无菌移液管1ml无菌移液管6只15ml试管7只高压灭菌锅天平水浴锅一个玻棒一根旋涡均匀器一台镜台测微尺电磁炉一个棉花纱布目镜测微尺牛皮纸麻绳接种环一个盖玻片酒精灯一盏牛角匙pH试纸血球计数板载玻片若干恒温培养箱酸度计擦镜纸、吸水纸液体石蜡显微镜载玻片玻片架、洗瓶、酒精灯火柴、滴管药品：结晶紫，乙醇，草酸铵，碘，碘化钾，番红，KOH，NaCl，10％NaOH，2%氯化铁。药品配制结

6、晶紫：结晶紫乙醇饱和液（结晶紫2g溶于20ml95%乙醇中）20ml，1g草酸铵于蒸馏水100ml。将两液混匀即成。卢戈氏碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加入蒸馏水300ml即成。蕃红溶液：番红2.5g，95%乙醇100ml，溶解后存于密闭的棕色瓶中。用时取10ml与80ml蒸馏水混匀即可。0.1%的吕氏美蓝染液：A液：美蓝0.3g，95%乙醇300ml；B液：0.01%KOH100ml。混合A和B液即成，按1：100稀释即可。生理盐水：

7、称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。实验步骤：一、培养基的培养1．称量用天平称取蛋白胨1g,牛肉膏1g,酵母提取物0.5g,柠檬酸二铵0.2g,乙酸钠0.5g,K2HPO40.2g,MnSO4·4H2O0.025g,MgSO4·7H2O0.06g,葡萄糖2g,吐温800.1mL,CaCO31g放入烧杯。2．溶解向上述烧杯中加入蒸馏水50mL无菌水，用玻璃棒搅匀后，放到酒精灯上加热,在石棉网上加热溶解后,加入2.5g琼脂，并继续用微火加热。在琼脂溶化的过程中，要控制火力的大小，并且不

8、断搅拌，以免培养基溢出或烧焦。待琼脂完全溶化后，补加蒸馏水至100mL。3．调节pH用滴管逐滴滴入1mol/L的NaOH溶液，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸测pH，直到pH到6.8左右。4．过滤要趁热用四层纱布过滤5．培养基的分装将培养基趁热分装到2个三角瓶里(一半为宜)。注意：分装时不要将培养基沾在管口和试管上段，以免引起污染。6．加棉塞培养基分装完毕以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染，保证通气良好。加棉塞时，应使棉塞长度的