乳酸菌的培养与分离.ppt

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1、乳酸菌的培养与分离→保加利亚乳杆菌指导老师：钟剑霞组长：王小英组员：王小英、郑春玲阙小琴、柳洁实验目的1、熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能，掌握油镜的原理和使用方法2、学习微生物涂片、染色的基本技术，了解并掌握革兰氏染色的原理3、观察认识保加利亚乳杆菌的形态，掌握用显微镜测微尺测量保加利亚乳杆菌的大小的测定的方法。4、通过对培养基的配制，了解配制培养基的一般步骤和方法，掌握微生物实验常用的器皿的清洗与包扎、培养基的制备、消毒灭菌。5、了解各种灭菌的基本原理和应用范围，掌握实验室中常用的立式高压蒸汽灭菌锅、干热灭

2、菌的操作技术。6、了解稀释平板计数的原理，熟练掌握混合平板培养法，掌握乳酸菌菌落总数测定的方法。7、熟练和掌握微生物的无菌操作接种技术。8、掌握倒平板的方法和几种分离纯化微生物的基本操作技术。9、初步学会乳酸菌培养的基本技术，了解并掌握保加利亚乳杆菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法。10、了解并掌握微生物菌种保藏的常用方法。实验原理实验器材样品：含乳酸菌的酸奶培养基：营养琼脂蛋白培养基材料：脱脂奶粉CaCO3吐温80蒸馏水草酸铵结晶紫溶液95%乙醇卢戈氏碘液番红溶液NaClNaOH溶液蛋白胨葡萄糖乳糖麦芽糖蔗糖仪器

3、用品：培养皿15个试管10个硅胶塞10个500ml烧杯1个玻片10个250ml三角瓶3个小导管10个量筒1个小胶帽4个接种工具“2（接种环）+1（接种棒）”擦镜纸100张双层瓶1个胶头滴管2个废液缸4个牛皮纸10张细绳、棉花洗气瓶托盘天平牛角匙玻棒、酒精灯显微镜测微尺恒温培养箱移液管1ml10个移液管10ml2个高压蒸汽灭菌锅吸水纸精密pH试纸显微镜电子天平超净工作台记号笔报纸乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。本实验中用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同,脱

4、色效果不同从而可以将细菌区分为G+和G-菌。通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌应为乳杆菌和乳球菌的混合体。酸奶中含有乳酸菌，而且目前市场上销售的酸奶中通常含有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。细菌及其它一些微生物的大小，通常用测微计来测量，测微计分接目测微计与镜台测微计；培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组份的营养物质调制而成的营养基质；灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物，包括芽孢；自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往

5、是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。实验原理实验内容稀释混合平板分离乳酸菌一、实验材料准备清洗玻璃器皿：培养皿、试管、移液管、烧杯、玻片、三角瓶、量筒等量取蒸馏水：用移液管分别量取9ml的蒸馏水于4支试管中，塞上硅胶塞；同样量取90ml的蒸馏水于一个三角瓶中，塞上棉花塞。将试管和三角瓶分别

6、进行牛皮纸包扎配制营养琼脂蛋白培养基（A3组配）：500ml蒸馏水+15.5g营养琼脂蛋白粉末→微波炉加热溶解→用NaOH溶液调pH=7.0→趁热取150ml、100ml分装于两个三角瓶中→塞上棉塞→牛皮纸包扎包装空玻璃器皿：培养皿（12个）、移液管等消毒灭菌：将包扎好的培养皿和移液管放入干燥灭菌箱灭菌165℃1～2小时将包扎好的三角瓶和试管放入高温蒸汽灭菌锅灭菌121℃20mim实验前的准备二、制备样品梯度稀释液在无菌操作台：将样品酸奶摇匀→用无菌移液管吸取10ml于装有90ml的无菌水的三角瓶中→振荡均匀→10-

7、1稀释度的菌悬液。在实验台（酒精灯附近）：①用一支1ml无菌移液管从10-1稀释度的菌悬液中吸取1ml注入装有9ml无菌水的试管中→振荡均匀→10-2稀释度的菌悬液；②用一支1ml无菌移液管从10-2稀释度的菌悬液中吸取1ml注入装有9ml无菌水的试管中→振荡均匀→10-3稀释度的菌悬液；③用一支1ml无菌移液管从10-3稀释度的菌悬液中吸取1ml注入装有9ml无菌水的试管中→振荡均匀→10-4稀释度的菌悬液；④用一支1ml无菌移液管从10-4稀释度的菌悬液中吸取1ml注入装有9ml无菌水的试管中→振荡均匀→10-5

8、稀释度的菌悬液；三、制作平行梯度（稀释混合平板接种培养法）取无菌培养皿12个→编号标明10-2、10-3、10-4、10-5各三套→分别吸取1ml的10-2、10-3、10-4、10-5稀释度的菌悬液对号放入平板中→将经高温消毒的培养基按无菌操作法倒入12个培养皿中→置在实验台上进行转动，使样品中的微生物与培养基混合均匀→冷凝制成平板→倒置于4