优良醋酸菌的分离鉴定.pdf

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1、江西化工2014年第1期优良醋酸茵的分离鉴定徐佳刘明珠(南昌理工学院，江西南昌330045)摘要：采用稀释平板分离法和划线分离法，从自然发酵苹果醋醪液中分离选出优良菌株P一7，并对该菌株的形态学及其生理生化学特征进行研究，该菌株在平板上菌体生长旺盛，菌落呈油脂状，米白色，表面平滑，边缘整齐，培养基内不产生色素，菌落周围产生透明圈，通过革兰氏染色试验和氧化发酵试验，确定该菌种为氧化性的革兰氏阴性杆菌，无鞭毛运动，具有氧化乙醇和乙酸等生化特征，通过《伯杰细菌鉴定手册》，菌株P一7初步鉴定为醋酸醋酸细菌醋酸亚种。关键词：醋酸

2、菌分离鉴定果醋是以水果或果品加工的下脚料为主要原料，和利夫森二氏培养基]、乙醇氧化培养基C4J、牛肉膏蛋经酒精发酵、醋酸发酵酿造而成的一种酸性调味品或白胨培养基J、Hoyer—Frateur培养基J、午肉膏蛋白饮料⋯。随着人们生活水平的不断提高，果醋的保健胨培养基、产硫化氢培养基、生酮实验培养基、功能也越来越受到人们的重视，正掀起喝果醋的热潮。葡萄糖培养基、产葡萄糖酸实验培养基【4]、明胶液化在我国民间，食醋生产通常采用存在于自然界中培养基】、葡萄糖蛋白胨水培养基¨J。的醋酸菌进行自然发酵。在工厂为了提高产量和质1．1

3、．4试剂量，避免杂菌污染，采用人工接种的方式进行发酵。果溴百里酚蓝1％(v)水溶液J、溴酚蓝0．04％醋品种是影响果醋品质的关键因素之一，用于食醋生(g／v)水溶液、pH7．21／15M磷酸缓冲溶液、菲林产的细菌有纹膜醋酸菌(A．aceti)、许氏醋杆菌(A．试剂J、甲基红(Methylred)指示液-4J、一萘酚溶schutzenbachii)、奥尔兰醋酸酐菌(A．1"ancens)、巴氏醋液引。酸菌(A．pasteurianus)、巴氏亚种(沪酿1．O1)等j，但1．2试验方法目前使用得最多的是：恶臭醋杆菌、浑浊变

4、种、巴氏醋1．2．1菌种的分离⋯酸菌、巴氏亚种4种醋酸菌J。目前国内外对醋酸菌水果一清洗+去核、切块一打浆一自然酒精发酵优质菌株的分类鉴定及性能等方面已经做了大量的研一自然醋酸发酵一菌源一增殖培养一稀释平板分离一究工作。初筛一斜面培养一纯化一斜面保藏菌株。1材料与方法1．2．2菌种的形学鉴定1．1材料1．2．2．1菌落形态观察：利用划线分离法以及简1．1．1菌种来源单染色法进行观察。市购残次水果，洗净污垢，打浆，置于实验室，进行1．2．2．2鞭毛生长情况的察：半固体直立柱穿自然酒精发酵和醋酸发酵。待发酵醪液形成刺激性醋

5、刺线上群体生长是否扩散来判断。味时，开始从中筛选天然的醋酸菌种。1．2．2．3革兰氏染色：用细菌的革兰氏染色法观1．1．2仪器设备察颜色(注：做革兰氏染色的菌的培养不能超过24h，以电子天平AE一100型(梅特勒一托利多上海公免出现假阴性)。司)；离心机LD5—2A型(北京医用离心机厂)；台式干1．2．3菌株的特殊生理特征实验燥箱(中国重庆)；显微镜(江西凤凰光学仪器有限公1．2．3．1葡萄糖的氧化发酵测定司)；生化培养箱LRH一250A型(广东省医疗器械厂)；用18—24h的幼龄菌做种子，穿刺接种于休和利超净工作台(

6、苏净集团安泰公司制造)；电热恒温水浴夫森二氏培养基，每株4支。其中两支用灭菌的凡士锅(上海精密实验设备有限公司)；LS—B501灭菌锅林油封盖，约0．5一lear厚，以隔绝空气为闭管。另两(上海华线医用核子仪器有限公司)；ZHWY一2112B恒只为开管。同时还要有不接种的闭管作对照。将试管温摇床(上海智城分析仪器制造有限公司)等。置于3O℃的温箱内培养1，2，4，7，14d观察结果。(注：1．1．3培养基本试验可同时观察细菌的运动性。)增殖培养基”、分离培养基、斜面培养基、休1．2．3．2乙醇的氧化2014年3月优良醋

7、酸菌的分离鉴定91接种两环菌株P一7于乙醇氧化培养基试管中，置1．2．3．9淀粉水解试验于3O℃的温箱内培养内培养1，2，4，7，14d观察产酸变在牛肉膏蛋白胨培养基中加人0．2％的可溶性淀黄者为阳性，不变黄者为阴性。粉，0．1Mpa灭菌20min后，倒平板，用接种环将菌株P1．2．3．3乙酸的氧化一7使用划线法接种于此培养基平板上，置于30℃的观察培养分离培养基上的细菌生长状况，置于温箱内培养4d。观察菌体生长情况，将平皿盖打开，滴30~C的温箱内培养内2d，能使CaCO，形成白色透明圈，入少量Lugol’s碘液于平

8、皿中，轻轻旋转平皿，使碘液继续培养2，3，5，7天，乙酸将进一步氧化分解，产生均匀铺满整个平皿。如菌台周围出现无色透明圈，说CO和水，菌落周围出现白色晕圈者为阳性否则为阴明淀粉已被水解，为阳性。透明圈的大小可初步判断性。该菌水解淀粉能力的强弱。1．2．3．4接触酶试验1．2．3．10产葡萄糖酸试验将菌株P一7接种于牛肉膏蛋白胨斜面