免疫表面展示 dll4 蛋白的家蚕杆状病毒对【推荐论文】

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1、精品论文免疫表面展示Dll4蛋白的家蚕杆状病毒对小鼠肺癌的抑制作用张浩1，张耀洲25（1.浙江理工大学生命科学院，杭州；2.天津市国际生物医药联合研究院，天津）摘要：Dll4(Delta-Like4)蛋白是Notch信号通路的一个配体，在血管生成过程中起到关键作用。据研究，在许多肿瘤中如乳腺癌、胃癌等都存在Dll4蛋白过表达现象。当封闭Dll4通路时肿瘤会因所生成的血管分支过多，无功能化，无法正常输送氧气和营养从而抑制肿瘤的10生长。将人源Dll4基因利用重叠PCR方法与家蚕杆状病毒信封蛋白gp64的信号肽序列和跨膜区序列连接。并将该片段插入到pFastBac1载体多克隆位点BamH1

2、和Xhol1两个酶切位点之间。利用Bac-to-Bac系统，构建表面展示Dll4蛋白的家蚕杆状病毒。经WesterBlotting及细胞免疫荧光检测证明重组的杆状病毒在家蚕细胞中表达Dll4蛋白。将重组杆状病毒BmN细胞进行扩增,并将病毒上清液50000rpm超速离心45mins，用PBS重悬沉淀，进行30%15和60%的蔗糖梯度密度离心，收集区带，脱糖后，取少量制样，进行WesternBlotting鉴定，结果表明纯化获得的杆状病毒中含有Dll4蛋白。将脱糖后获得的病毒进行蛋白定量后，以每份100μg粗蛋白注射免疫C57BL/6小鼠。每隔七天进行一次免疫，连续免疫3次，第三次免疫后第

3、二天接种小鼠Lewis肺癌细胞。每隔一日检查并记录肿瘤生长情况。接瘤12天后，对实验小鼠眼眶取血，并拉颈处死，剥取瘤体，测量体积。将所取的血清用ELISA检20测Dll4抗体效价。经检测，在10μg/mL抗原包被的情况下疫苗组小鼠血清中Dll4抗体效价为1：3200，而免疫野生杆状病毒组及对照组未检测到Dll4抗体。与对照组比较，疫苗免疫组的肿瘤体积约为对照组的50%，说明免疫表面展示Dll4蛋白的家蚕杆状病毒对小鼠肺癌具有一定抑制作用。关键词：分子生物学；杆状病毒；Dll4；肿瘤疫苗25中图分类号：R73-36+2TheinhibitionofimmuningBmNPVdisplay

4、ingDll4tomouselungcanerZHANGHao1,ZHANGYaozhou230(1.ZhejiangSci-TechUniversitySchoolofLifeSciences,HangZhou;2.TianjinInternationalJointofBiotechnology&Medicine,TianJin)Abstract:ItisreportthatDll4havebedetectedoverexpressioninmajoritykindsofcancersuchasbreastcancer，gastriccancer，lungcancer.Whenblo

5、ckadeDll4functionresultsinhypersproutingduetothelossoflateralinhibitionoftheendothelialtipcellphenotypemediated35throughNotch1.Asaconsequence,anexcessive,butnonproductive,angiogenicresponseismounted,characterizedbypoorperfusionthatresultsinhypoxia.AmplifiedhumanDll4geneandsignaolPepitide,transme

6、mbraneareaofgp64withPCRthensplicedwithoverlapextensionPCR.ClonetheSP-Dll4-TMintopFastBac1betweenBamH1andXhol1clonesite,TransformatingpPastBac1gp64Dll4intoDH10Bac,choosingwhitespotcultureandextractingBacmidgenome,40usingliposometransfectintoBmNcell.Aftersixdays,cellloatobviously.Extractviralgenom

7、e,PCRidentification.ThentransferthevirusinthebottleofBmN,afterthreedays,12000RPMcentrifugal30mins,collectthecellsandsupernatant,50000RPMspeedcentrifugal45min,withPBSsuspendingprecipitation,30%and60%sucrosedensitygradientcent