用KTA explorer 10蛋白纯化系统分离纯化家蚕类免疫球蛋白.pdf

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1、Sc{encleO'1．

2、2013，39(4)：0732—0738ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．ca用AKTAexplorer10蛋白纯化系统分离纯化家蚕类免疫球蛋白杜瑶瑶刘玲玲王鉴舒建洪张耀洲(浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所，杭州310018；天津市国际生物医药联合研究院，天津300457)摘要类免疫球蛋白(Hemolin)是昆虫的先天性免疫蛋白。为了获取纯度高、具有天然活性的家蚕Hemolin，将被家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染的家蚕蛹进行匀浆处理，离心后对上清液进行DEAE弱

3、阴离子交换层析，进而利用Superdex200凝胶过滤层析获得家蚕Hemolin的初级纯化产物，经质谱鉴定验证后再利用Superdex75凝胶过滤层析对初级产物做进一步分离纯化。获得的纯化产物采用SDS．PAGE和Westernblot检测到单一的大小约45kD的蛋白质条带。采用该层析技术与条件能有效制备出纯度较高的具有天然活性的家蚕Hemolin。关键词家蚕蛹；类免疫球蛋白；家蚕核型多角体病毒；弱阴离子交换层析；凝胶过滤层析中图分类号$881．2；Q512．2文献标识码B文章编号0257—4799(2013)04—0732—07SeparationandPurifica

4、tionofBombyxmoriHemolinwithAKTAiX-plorer10ProteinPurificationSystemDUYao．Yao’LIULing．LingWANGJianSHUJian—Hong’ZHANGYao—Zhou’(’InstituteofBiochemistryCollegeofLifeSciences．ZhejiangSci-TechUniversity．Hangzhou310018China；2TIanjInInternationalJointAcademyofBiotechnologyandMedicine，Tianjin3004

5、57，China)AbstractHemoliniSakindOfinnateimmuneglobulinswhichhavebeenfoundinseveraIinsectspecies．ToobtainHemolinwithhighpurityandnaturalactivityfromsilkworm(Bombyxmori)pupae，BombyxmorinucIeopoIyhedroVirus(BmNPV)一infectedsilkwormpupaewerehomogenated．Aftercentrifugation，thesupernatewaspurifie

6、dwithDEAEweakanionexchangechromatographyandSuperdex200gelfiltrationchrOmatOgraphytoyieldprimaryproduct．Afterthepri—maryproductwasverifiedbymassspectrometry，itwasfurtherpurifiedwithSuperdex75．Asingleproteinbandofabout45kDwasdetectedfrOmthepurifiedproductbySDS—PAGEandWesternblot．indicatingt

7、hatitwassilkwormHemolinwithhighpurityTheaboveresultsindicatethatusingthesechromatographytechniquesandconditionscaneffectivelyseperatesilkwormHemolinwithhighpurityandnaturalactivityKeywordsBombyxmoripupae；Hemolin；BombyxmorinucleopoIyhedrovirus(BmNPV)；Weakanionexchangechro—matography；Gelfil

8、trationchromatography昆虫的起源可以追溯到3．5亿年前，经过长期收稿日期：2013—01—23接受日期：2013—02—03的进化，昆虫形成了一套独特的适应性防御机制。资助项目：国家高技术研究发展计划“863”项目(No．2011AA100603)，重大新药创制科技重大专项企业孵化基地建设项目(No．继20世纪80年代瑞典斯德歌尔摩大学的Boman2012ZX09401009)。研究小组在惜古比天蚕(Hyatophoracecropia)中成第一作者信息：杜瑶瑶(1988一)，女，硕士研究生。功地诱导表达抗