探索卵黄免疫球蛋白的分离纯化研究

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1、中国石油大学（华东）硕士学位论文卵黄免疫球蛋白的分离纯化研究姓名：杨娟申请学位级别：硕士专业：化学工程指导教师：徐海;刘建国20090501摘要在本论文中，采用氯仿．甲醇法系统考察了水稀释法的操作参数对卵黄除脂率的影响，获得了水稀释法的最佳脱脂工艺为：利用去离子水将卵黄溶液稀释6倍，调节pH至5．0，在．200C冷冻8h后，40C离心5mill，最小离心力为1200xg，经上述处理后，除脂率可达100％。利用参数扫描超滤技术对脱脂后的IgY粗溶液进行了分离和纯化研究。考察的超滤工艺有两种：(1)利用10

2、0．kDa再生纤维素膜进行单步分离。最佳分离工艺条件为：30mMNaCl+10mM磷酸钠缓冲溶液(pH6．O)，搅拌速率600rpm，流速13．3L／m2h。利用此工艺获得的IgY纯度为85％，回收率为90％；(2)利用100．kDa聚醚砜膜和100．kDa再生纤维素膜进行二级分离。100．kDa聚醚砜膜的最佳分离工艺条件为：70mMNaCI+10mM磷酸钠缓冲溶液(pH8．O)，搅拌速率1200rpm，流速26．5L／m2h；100．kDa再生纤维素膜的最佳分离工艺为：70mMNaCl+10mM磷酸钠

3、缓冲溶液(pH4．5)，搅拌速率600rpm，流速13．3L／m2h。利用此工艺获得的IgY纯度为93％，回收率为85％。通过等点聚焦、电泳、圆二色光谱、红外光谱和抑菌实验等对超滤获得IgY进行了分析和表征，从实验结果可知，IgY的等电点为pI6．2；IgY分子由两条重链和两条轻链组成，重链68kDa，轻链28ld)a，IgY的分子量约为192kDa；其二级结构中p折叠占j48％；活性高于盐析法获得的IgY产品。关键词：卵黄免疫球蛋白；膜分离；超滤；蛋白质分离；水稀释法Thestudyofisolati

4、onandpurificationofimmunoglobulinfromheneggyolkYangJuan(Chemicalengeneering)DirectedbyProfessorXuHal，LiuJianguoAbstractInthepresentwork,theparametersofwaterdilutionmethodareoptimizedtoremovethelipidsfromeggyolkusingchloroform·methanolmeans．The"optimalcon

5、ditionsarefollowings：theyolkcontentismixedwithsixvolumesofdistilledwater,adjustthesolutionpHto5．0andfrozenat-200Cover8h．Themixtureisthawedandcentrifugedat4oC，1200xgfor5minutes．Therateofremovedlipidscouldarrive100％underoptimalconditions．Twodifferentmembra

6、nemethodswerestudiedtoisolateandpunfyIgY(immunoglobulinfromeggyotk)fromthecrudeenzymesolutionusingparameterscanningultrafiltration．Onemethodisthesingle—stageultrafiltrationusing100-kDaregeneratedcellulose(RC)membrane．Theoptimizedconditionsarefollowings：1

7、0mMphosphatebuffercontaining30mMNaCI(pH6．o)；stirringspeed,600rpm；permeateflux，13，3L／m2h．Undertheseconditions，thepurityandrecoveryofIgYare85％and90％，respectively．Theothermethodisthetwo··stageultrafiltrationusing100--lcDapolyethersulfone(PES)membraneand100一

8、kDaRCmembrane．Theoptimizedconditionsfor100-kDaPESmembranearefollowings：10mMphosphatebuffercontaining70mMNaCl(pn8．0)；stirringspeed，1200rpm；permeateflux，26．5L／m2h；Theoptimizedconditionsfor100一kDaRCmembranearefollowings：10mMp