猪瘟病毒重组融合蛋白e-a-e在家蚕杆状病毒表面的展示

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1、猪瘟病毒重组融合蛋白E2-2A-E0在家蚕杆状病毒表面的展示猪瘟病毒重组融合蛋白E2-2A-E0在家蚕杆状病毒表面的展示猪瘟病毒重组融合蛋白E2-2A-E0在家蚕杆状病毒表面的展示#张学赛1,2，单茜茜1,2，陈剑清1,2，舒特俊1,2，张耀洲1,2**51015202530354045（1.浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所，杭州310018；2.浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州310018）摘要：本研究旨在构建杆状病毒表面展示系统转移载体pFastBac1-gp64，并将猪瘟病毒重组融合蛋白展示于细胞和杆状病毒囊膜表面，以用于新型猪瘟疫苗的研制。我们首先

2、利用SOE-PCR、PCR、双酶切等相关技术构建出杆状病毒表面展示系统转移载体pFastBac1-gp64；然后构建大肠杆菌重组表达质粒pET-28a-E2-2A-E0，在E.coliRosetta中表达目的融合蛋白，通过包涵体洗涤及镍离子亲和层析大量纯化目的蛋白，免疫新西兰雄兔制备多克隆抗体，以备后续实验检测之用，用间接ELISA法其效价为1:51200。同时构建重组转移载体pFastBac1-gp64-E2-2A-E0，通过Bac-to-Bac系统获取重组杆状病毒Bmgp64-E2-2A-E0，经SDS-PAGE、Westernblotting鉴定分析及激光共聚焦显微镜观察，结

3、果表明重组融合蛋白成功在家蚕BmN细胞、家蚕五龄幼虫和家蚕蛹中表达并展示于细胞及杆状病毒囊膜表面，便于接下来对重组杆状病毒免疫原性的研究及新型猪瘟疫苗的研制。关键词：生物化学与分子生物学；CSFV；家蚕杆状病毒表面展示系统；猪瘟疫苗中图分类号：Q78ThesurfacedisplayofrecombinantfusionproteinE2-2A-E0ofCSFVonbaculovirusenvelopeZhangXuesai1,2,ShanQianqian1,2,ChenJianqing1,2,ShuTejun1,2,ZhangYaozhou1,21.InstituteofBioc

4、hemistry,CollegeofLifeScience,ZhejiangSci-TechUniversity,HangZhou310018;2.ZhejiangProvencialKeyLaboratoryofSilkwormBioreactorandBiomedicine,HangZhou310018Abstract:ThispaperaimedtoconstructthetransfervectorpFastBac1-gp64ofbaculovirussurfacedisplaysystemandtobeusedfordevelopanewclassicalswinefev

5、ervaccine.Thisvaccinewasapseudovirion,itwasdisplayingtheclassicalswinefevervirusrecombinantfusionproteinonthesurfaceofBmNcellsandbaculovirusenvelope.WefirstuseSOE-PCR,PCR,restrictionenzymedigestionandotherrelatedmoleculartechnologytoconstructabaculovirussurfacedisplaysystemtransfervectorpFastB

6、ac1-gp64;ThenconstructrecombinantexpressionplasmidpET-28a-E2-2A-E0,andexpressedfusionproteininE.coliRosetta,andpurifyingthefusionproteinbymeansofwashinginclusionbodiesandnickelionaffinitychromatography,aftergettingenoughprotein,immunizedNewZealandmalerabbittoobtainpolyclonalantibodyforsubseque

7、ntexperimentaltestingpurposes.WhileweconstructrecombinanttransfervectorpFastBac1-gp64-E2-2A-E0,thenobtainrecombinantbaculovirusBmgp64-E2-2A-E0byBac-to-Bacsystem.AfterSDS-PAGE,Westernblottinganalysisandidentificationoflaserscanningconfoc