创建可视化的家蚕杆状病毒表达系统表达家蚕二分浓核病毒非结构蛋白NS1.pdf

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1、生物工程学报李国辉等／创建可视化的家蚕杆状病毒表达系统表达家蚕二分浓核病毒非结构蛋白Nsl—四ChineseJournalofBiOtechnOIOgyhttp：／／journals．im．ac．cn／cjbcnApril25，2014，30(4)：625—635DOI：10．13345／j．cjb．130436@2014ChinJBiotech，Allrightsreserved创建可视化的家蚕杆状病毒表达系统表达家蚕二分浓核病毒非结构蛋白NS1李国辉，王鹏，李芒芒，徐五，胡朝阳，姚勤江苏大学生命科学研究

2、院，江苏镇江212013李国辉，王鹏，李芒芒，等．创建可视化的家蚕杆状病毒表达系统表达家蚕二分浓核病毒非结构蛋白NSI．生物工程学报，2014，3O(4)：625—635．LiGH，Wangp’LiMM，eta1．ExpressionofnslgenefromBombyxmoribidensovirusbyanovelBaculovirusexpressionsystem．ChinJBiotech，2014，3O(4)：625—635．摘要：重组杆状病毒感染昆虫细胞是表达外源蛋白常用的一种方法。为有效鉴定转

3、染的细胞中是否产生了重组病毒粒子，对质粒pFastBacI进行改造，构建了极早期基因』启动子控制的绿色荧光蛋白egfp基因表达盒，以及多角体基因启动子控制的外源DNA的一个通用型双表达载体；通过酶切、连接的方式，将家蚕二分浓核病毒nsl基因连接到多角体启动子下游；在转座酶的介导下，该供体质粒上部分序列可转座到穿梭载体Bm．Bacmid上，进而构建可同时表达egfp和nsl基因的重组杆粒。将构建的该重组杆粒DNA转染BmN细胞，通过观察可视化的绿色荧光信号，可迅速判定转染后的细胞中重组病毒粒子产生的情况，收集

4、转染后的细胞培养上清，将其感染BmN细胞，对感染4d后的细胞总蛋白进行Westernblotting分析，结果表明能杂交到一条36kDa大小的特异蛋白，表明NS1蛋白成功获得了表达，进而为深入研究nsl基因的功能奠定了基础。关键词：杆状病毒，基因表达，家蚕二分浓核病毒，非结构蛋白NS1Received：August26，2013；Accepted：December18，2013Supportedby：NationalNaturalScienceFoundationofChina(Nos．31000080，3

5、1270192)，StartupScientificResearchFundfromJiangsuUniversity(No．09JDG057)．Correspondingauthor：GuohuiLi．Tel：+86—511-8879702l；E—mail：1000003593@mail．ujs．edu．cn国家自然科学基金(Nos．31000080，31270192)，江苏大学高级人才基金(No．09JDG057)资助。日ISSN1000—3061CN11-1998／QChinJBi。techApril

6、25，2014Vo1．30No．4ExpressionofnslgenefromBombyxmoribidensovirusbyanovelBaculovirusexpressionsystemGuohuiLi，PengWang，MangmangLi，WuXu，ZhaoyangHu，andQinYaoInstituteofLScience，JiangsuUniversity，Zhenjiang212013，Jiangsu，ChinaAbstract：Baculovirusgeneexpressionisth

7、emostpopularmethodtomaketargetproteininculturedinsectcells．Tofastdeterminethegenerationofrecombinantvirusinculturedcells，donorplasmidofpFastBac1wasmodifiedbyintroducingegfpcassette．Inthemodifiedvector，e#pcassettewasunderthecontrolofielpromoter，andtargetgen

8、ecassettewasunderthecontrolofpolyhedronpromoter．Toevaluatetheconvenienceofthegeneticallymodifieddonorplasmidusedineukaryoticexpression，nslgenefromBombyxmoribidensoviruswasligatedintothedonorplasmidtogenerater