家蚕浓核病毒（镇江株）部分核苷酸序列分析及主要结构蛋白基因（vp）的表达

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1、家蚕浓核病毒(镇江株)部分核苷酸序列分析及主要结构蛋白基因(叩)的表达中文摘要本文对家蚕浓核病毒(BombyxmoriDensovims，BmDNV)(镇江株)的部分核苷酸序列进行了研究，克隆并用火肠杆菌表达了主要结构蛋白基因，试图从分子水平、基因水平对它与山梨株的亲缘关系进行探讨。．根据己发表的日本山梨株的序列片段1(VDl)设计了一对引物，克隆了1．5Kb的土要结构蛋白基因(印)，测序并用Dna-Star软件分析了两者的同源性。该片段与山梨株VD】一ORF2的同源性为98．1％，有29处核苷酸发生了突变：推测的氨基酸序列与山

2、梨株的同源性为98．6％，有7个氨基酸发生了替换。该序列已经在GeneBank登录，登录号为AY236978二．根据已发表的日本山梨株的序列片段2(VD2)在两个开放阅读框(ORFs)之间设训了一对引物，扩增得到了992bp位于两个开放阅读框(ORFs)之间的一个片段，测序并用Dna一所口r软件分析了两者的同源性。该片段与BmDNV山梨株相戍部分的同源性为98．5％．位于两个开放阅读框(oRFs)之间的序列有缺失或插入突变。三．在NCBI数据库中用Blast软件在线检索，除家蚕浓核病毒山梨株DNA外．未发现其他同源序列。四．将病

3、毒的主要结构蛋白基因(甲)插入到表达质粒pET．28a多克隆位点BamHI与＆oRI之间，使其位于诱导型启动子LaeZ之后，转化到BL21(DE3)菌株，进行了诱导表达。表达产物在SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈现特异的条带，大小约为53KD，与预计的大小大致相近。用Western-blowing检测表达产物，可以与病毒的抗体产生特异的反应，表明其为病毒的结构蛋白基冈。五．上述结果表明，BmDNV镇江株和山梨株一样，病毒的基因组是由两个片段组成，并且两者的核菅酸序列有很高的同源性(商达98％以上)，而与其他浓核病毒的核营酸序列没有

4、同源性，可以认为两者是同种病毒的不同分离株。关键词家蚕浓核病毒(镇江株)主要结构蛋白基因克隆表达WesternblowingAnalysisofPartialDNASequencesofBombyxmoriDensovirus(Zhenjiangstain)andExpressionofItsMajorStructuralProtein(vp)GeneinEscherichiacoliAbstractAnattempttoidentifytherelationshipbetweenBombyxmarlDensovirus(BmD

5、NV)ZhenjiangstrainandBmDNVYamanashistrain，partialDNAsequencesofBmDNV(Zhenjiangstrain)weredeterminedandcomparedwiththecorrespondingregionofBmDNV(Yamanashistrain)．Themajorviralstructuralprotein(vp)gonewasexpressedbyEscheriehiacoli(EcoldexpressionsystemandexaminedbyWest

6、ern—blottingassay．1．BasedonnucleotidesequencesofBmDNV(Yamanashistrain)VD]segment，oligonuclotideprimerswasdesigned．Employingthedesigned·primers，afragmentofnucleotidesequencesabout1-5Kb，whichisspeculatedtobethemajorstructuralprotein(vp)gene，wasamplifiedfromthegenomicDN

7、AofBmDNV(Zhenjiangstrain)bypolymerasechainreaction(PCR)．SequencedandanalyzedwithDna-starsoftware，thenucleotidesequenceoftheclonedstructuralprotein(vp)goneanditsdeducedaminoacidsequencearehighlyhomologouswithitshomoiogueinBmDNVYamanashistrain．withtheidentityof98．1％and

8、98．6％respectively．ComparedwithYamanashistrain，29basesand7aminoacidsofthevpgoneweresubstitutedinZhenjiangstrain，respectively．Noreadi