家蚕微孢子虫表面蛋白的鉴定研究

《家蚕微孢子虫表面蛋白的鉴定研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、,•、涑‘riif？wL»tiK’.•.*,硕士学位论文<,Vz•象養救祗子2k来面蚤合的基走研念r-/V&,.‘广•、i#.-^--..^-.指导教师：周泽扬教授李治专业名珎：撖生物学微生物功能基因组学‘、-.-独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆师范大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明。学位论文作者签名：签字日期年&/0日学位论文版权使用

2、授权书本学位论文作者完全了解重庆师范大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权重庆师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。学位论文作者签名:&签字日期：上年/月/D日重庆师范大学硕士学位论文家蚕微孢子虫表面蛋白的鉴定研究硕士研究生：赵唯希指导教师：周泽扬教授李治学科专业：微生物学所在学院：生命科学学院重庆师范大学二〇一五年五月DissertationforMasterDegreeofChongqingNorma

3、lUniversityIdentificationofthesurfaceproteinsinmicrosporidiaNosemabombycisCandidate：WeixiZhaoSupervisor：Prof.ZeyangZhouZhiLiMajor：MicrobiologyCollege：CollegeofLifeScienceChongqingNormalUniversityMay，2015重庆师范大学硕士毕业论文中文摘要家蚕微孢子虫表面蛋白的鉴定研究摘要微孢子虫是一类专营细胞内寄生生活的单细胞真核生物。微孢子虫有1300余种、近160个属，对人类

4、健康、养蚕业、养蜂业、水产养殖业等造成严重威胁。家蚕微孢子虫是家蚕微粒子病的病原，对世界各地养蚕区造成严重的经济损失，目前还没有特别有效的疫苗或药物能够防控家蚕微孢子虫的感染。病原体的表面蛋白是最先、最直接接触宿主细胞的物质，能介导寄生虫——宿主的相互作用。家蚕微孢子虫的表面蛋白暴露于孢子最外层，在信号识别、孢子粘附宿主细胞等过程中发挥着关键的作用。因此，系统的鉴定家蚕微孢子虫表面蛋白的组成对于研究家蚕微孢子虫的侵染机制非常重要，也可为控制家蚕微孢子虫病提供有效的诊断标志和药物靶标。然而，由于技术障碍，专门针对家蚕微孢子虫表面蛋白质组鉴定的研究资料很少。本研究

5、通过生物素-链亲和素系统、蛋白质组学方法对家蚕微孢子虫表面蛋白进行了分离和鉴定。主要研究结果如下：1．家蚕微孢子虫表面蛋白的生物素标记效果家蚕微孢子虫孢子经生物素Sulfo-NHS-SS-biotin孵育后，采用间接免疫荧光定位（IFA）检测其标记效果，结果显示在孢子表面有强烈的绿色荧光信号。与此相反，在未经处理的孢子表面以及孢子内部细胞器等没有检测到阳性荧光信号。这些结果表明，家蚕微孢子虫孢子表面蛋白被生物素成功标记。2．家蚕微孢子虫总蛋白提取条件的优化提取到丰富的总蛋白是分离纯化获得尽可能丰富表面蛋白的前提。然而，家蚕微孢子虫孢壁的几丁质特殊结构，给孢子总

6、蛋白的提取增加了难度。为了解决这一问题，我们采用了高温高压法、煮沸法、研磨法、超声波破碎法，并结合尿素、SDT、Leammli、NaOH裂解缓冲液探索提取家蚕微孢子虫总蛋白的最佳条件。SDS-PAGE检测结果显示：0.1M的NaOH裂解液整合超声波破碎法提到的总蛋白最为丰富，为本研究采用的最优方法。3．家蚕微孢子虫表面蛋白的分离和质谱鉴定分离纯化被生物素标记的家蚕微孢子虫表面蛋白，LC-MS/MS质谱鉴定和生物信息学分析，最终鉴定获得23个假定表面蛋白。其中，有5个已报道的定位于I重庆师范大学硕士毕业论文中文摘要家蚕微孢子虫表面的蛋白，分别是SWP5、SWP8

7、、SWP12、SWP26、SWP30；另有6个假定表面蛋白预测有信号肽，1个假定表面蛋白（登录号EOB13402.1）有跨膜域；有8个假定表面蛋白被信息学预测为假定细胞外蛋白质，有7个假定表面蛋白没有功能注释。这23个假定表面蛋白的GO分类结果显示，其中11个蛋白质能参与生物学过程，9个推测涉及生物粘附性和对刺激的反应以及生长或代谢过程，有8个具有ATP、GTP和核苷酸结合能力以及催化或翻译调节功能。4．家蚕微孢子虫假定表面蛋白SWP5、SWP8、SWP12、SWP26、SWP30、EOB14207.1的亚细胞定位实验验证为了进一步验证质谱鉴定的蛋白是否为表面

8、蛋白，本研究选取了质谱结果中的5个表面