家蚕微孢子虫孢壁蛋白swp25互作蛋白的筛选及endoreticulatus sp.zhenjiang α-微管蛋白的研究

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1、学校代码：10289分类号：Q93密级：公开学号：122310005江苏科技大学硕士学位论文家蚕微孢子虫孢壁蛋白SWP25互作蛋白的筛选及Endoreticulatussp.Zhenjiangα-微管蛋白的研究研究生姓名肖圣燕导师姓名沈中元申请学位类别理学硕士学位授予单位江苏科技大学学科专业微生物论文提交日期2015年6月1日研究方向微生物分子生物学论文答辩日期2015年6月3日答辩委员会主席沈兴家评阅人2015年6月5日分类号：Q93密级：公开学号：122310005理学硕士学位论文家蚕微孢子虫孢壁蛋白SWP25互作蛋白的筛选及Endo

2、reticulatussp.Zhenjiangα-微管蛋白的研究学生姓名肖圣燕指导教师沈中元研究员江苏科技大学二O一五年六月AThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceScreeningofproteinsinteractingwiththesporewallprotein25ofNosemabombycisandresearchonthealpha-tubulinproteinofEndoreticulatussp.Zhenjian

3、gSubmittedbyXiaoShengyanSupervisedbyShenZhongyuanJiangsuUniversityofScienceandTechnologyJune,2015江苏科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日江苏科技大学学位论文

4、版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)不保密□。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要摘要微孢子虫是一类专营细胞内寄生的单细胞真核生物，该病原体具有广泛的寄主域，从原生生物到哺乳动物，包括人类都能够被其感染。家蚕微粒子病作为蚕桑

5、业中的重要病害，每年给蚕业生产造成巨大的经济损失。随着N.bombycis基因组学、相关分子侵染机制以及检测防控技术体系构建等研究工作的开展与推进，近10年来，有关N.bombycis的研究取得了较大的进展。但是，明确N.bombycis的侵染机制，攻克微粒子病这一顽症，目前依然是世界蚕业界研究领域的重点和难点。微孢子虫的孢壁位于孢子的最外层，主要由蛋白质和几丁质构成，孢壁蛋白是孢子壁的主要组成成分。在对N.bombycis孢壁蛋白的研究中，发现并获得了与侵染寄主、稳定孢壁结构及增殖等活动相关的重要蛋白质。目前，已发现并报道的N.bomb

6、ycis孢壁蛋白主要有：SWP5、SWP11、SWP12、SWP16、SWP25、SWP26、SWP30与SWP32。其中，SWP5不仅能够与微孢子虫极管相互作用，还参与细胞吞噬作用；SWP26参与了N.bombycis对宿主家蚕的粘附过程，进而影响了孢子对宿主细胞的侵染，该蛋白中的肝素结合基序（heparinbindingmotif,HBM）在介导N.bombycis孢子对宿主细胞的粘附和侵染中起到了重要作用。N.bombycis孢壁蛋白SWP25位于N.bombycis孢子壁的内壁，有一个含有20个氨基酸的信号肽。此外，该孢壁蛋白也含

7、有一个能够参与孢子粘附的肝素结合基序。我们希望通过本研究，筛选与SWP25相互作用的家蚕蛋白，探索孢壁蛋白SWP25在N.bombycis侵染宿主过程中可能发挥的生物学功能。本研究中我们利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，将绿色荧光蛋白报告基因EGFP和N.bombycis孢壁蛋白SWP25基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac1中，随后转EGFP-SWP25化大肠杆菌BmDH10Bac感受态细胞，经同源重组获得vBm质粒，随后将此杆状病毒穿梭质粒转染家蚕卵巢细胞（BmN）获得重组杆状病毒。转染成功的细胞可观测到明显的绿色荧光信

8、号，同时利用Westernblot方法，可在被重组杆状病毒感染的BmN细胞中检测到大小约55kDa蛋白条带的存在。结果表明，N.bombycis孢壁蛋白SWP25基因可与EGFP基因融合，并在