家蚕类泛素化修饰蛋白的鉴定及bmnpv早期蛋白pe38与宿主互作蛋白的研究

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1、学校代码：10289分类号：Q93密级：公开学号：122300009江苏科技大学硕士学位论文家蚕类泛素化修饰蛋白的鉴定及BmNPV早期蛋白PE38与宿主互作蛋白的研究研究生姓名付绪亮导师姓名沈中元唐旭东申请学位类别硕士学位授予单位江苏科技大学学科专业生物化学与分子生物学论文提交日期2015年6月1日研究方向家蚕分子病理学论文答辩日期2015年6月3日答辩委员会主席沈兴家评阅人吴金美陈芳艳郝碧芳刘挺2015年6月1日分类号：Q93密级：公开编号：理学硕士学位论文家蚕类泛素化修饰蛋白的鉴定及BmNPV早期蛋白PE38与宿主互作

2、蛋白的研究学生姓名付绪亮指导教师沈中元研究员唐旭东老师江苏科技大学二O一五年六月AThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceIdentificationofSUMOylatedProteinsinthesilkwormandresearchontheBmNPVearlyproteinPE38withItsInteractiveProteinofHost,BombyxmoriSubmittedbyFuXuliangSup

3、ervisedbyProf.ShenZhongyuanDr.TangXudongJiangsuUniversityofScienceandTechnologyJune,2015江苏科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日江苏科技大学学位论文版

4、权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)不保密。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要摘要众所周知，蛋白质的翻译后修饰（Post-TranslationalModifications,PTMs）在很大程度上决定了蛋

5、白质的活性、功能发挥、细胞定位、稳定性及蛋白质之间的相互作用等一系列生物学功能，在机体受到外界刺激时能够对蛋白质功能起着精细的调节作用，进而有助于机体针对外源刺激产生快速有效的反应。细胞内存在多种蛋白质翻译后调控方式，如泛素化、磷酸化、乙酰化、甲基化等等，它们都对细胞蛋白质发挥正常的生物学功能有着至关重要的作用。小类泛素蛋白相关修饰物（SUMO）分子是一种新发现的类泛素分子，虽然它的氨基酸序列与泛素只有约18%的相似性，但是它们的三维结构非常相似，在功能上它同样参与蛋白质翻译后修饰。已有研究表明，蛋白质的类泛素化（SUMO

6、化）修饰作为一种重要的且可逆的翻译后水平调节机制，其参与了细胞周期调控、核质运输、蛋白亚细胞定位、蛋白互作和转录因子活性调节等很多非常重要的细胞生物学过程。家蚕是目前唯一一种可以大规模人工饲养的经济昆虫，家蚕核型多角体病毒（Bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirus,BmNPV）病（即家蚕血液型脓病）是养蚕业上最常见且危害最严重的蚕病之一，每年国内因感染BmNPV而引起的家蚕血液型脓病在蚕桑业生产上都会造成比较大的损失。BmNPV是引起家蚕血液型脓病的病原体，主要寄生在血细胞和体腔内各种组织的细胞

7、核中。BmNPV极早期蛋白基因pe38在病毒侵染早期起到极其重要的作用，PE38分子量大小为38kDa，通过亚细胞定位研究发现其主要集结在细胞核周围的点状区域，进一步对PE38蛋白的结构分析发现，其N末端附近包含一个核定位信号，中间部位拥有一个RING(C3HC4)finger结构，还有个亮氨酸拉链结构域位于其C末端附近。已有研究证实在缺失pe38的情况下，病毒的DNA合成水平会明显降低甚至还会极大地降低病毒对宿主的侵染性。本研究我们通过杆状病毒表达系统Bac-to-Bac、昆虫细胞瞬时转染、WesternBlot以及LC

8、-ESI-MS/MS质谱分析等实验技术，从家蚕BmN细胞以及BmNPV中总共筛选出68种家蚕蛋白和14种BmNPV蛋白可能是SUMO化修饰底物。随后分别从基因的分子功能、细胞组成成分和参与的生物过程三个方面进行GeneOntology注释，结果显示68种家蚕蛋白中有59种能够被匹配到GO中，基因的分子功