利用酵母双杂交系统筛选BmNPV PE38的互作蛋白.pdf

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1、5cioricoofSericulture2012，38(3)：0507—0511ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．Crl利用酵母双杂交系统筛选BmNPVPE38的互作蛋白管蕊唐旭东徐莉，朱峰沈中元，(江苏科技大学，江苏镇江212003；中国农业科学院蚕业研究所，江苏镇江212018)摘要利用酵母双杂交技术，以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的PE38蛋白为诱饵，从感染BmNPV的家蚕中肠组织cDNA文库中筛选与之相互作用的宿主蛋白编码基因，为探讨BmNPVPE38在侵染家蚕过程

2、中的作用提供线索。将成功构建的酵母诱饵表达载体pGBKT7一Pe38转化到酵母菌Y2HGold中，并将含有感染BmNPV的家蚕中肠组织cDNA文库的Y187酵母细胞与含有pGBKT7一Pe38的酵母细胞共同培养，初筛出8个有匹配结果的候选蛋白基因，经功能搜索后筛选到2个与病毒复制有关的蛋白基因，通过测序和生物信息学分析，这2个基因编码的蛋白质可能是与BmNPV的PE38蛋白有相互作用的候选蛋白，分别为家蚕丝氨酸蛋白酶和过氧化氢酶。关键词家蚕核型多角体病毒；家蚕；PE38蛋白；丝氨酸蛋白酶；过氧化氢酶；酵母双杂交系统中图分类号$881．2；$884．51

3、文献标识码A文章编号0257—4799(2012)03—0507—05IdentificationofBmNPVPE38一InteractiveProteinsUsingYeastTwo-hybridSystemGUANRuiTANGXu—Dong’，XULi’，ZHUFengSHENZhong．Yuan’'(’d~ngsuUniversityofScienceandTechno~gy，Zhenjiangd~ngsu212003，China；。TheSericulturalResearchInstitute，ChineseAcademyofAgricu

4、lturalSciences，Zhenjiangd~ngsu212018，China)AbstractInordertoprovidecluesforexploringtheroleofPE38proteinofBombyxmorinucIe0polyhedrovirus(Bm—NPV)initsinfectiontoBombyxmori．PE38proteinofBmNPVwasusedasbaitinyeasttwo—hybridsystemtoidentifygenesencodinghostproteinsinteractivewithPE38

5、inacDNAlibraryconstructedfromBmNPVinfectedBombyxmonmidgut．ThesuccessfullyconstructedyeastbaitexpressionvectorpGBKT7一Pe38wastransformedintoyeaststrainY2HGoldThen．Y187yeastcellsharboringcDNAlibraryconstructedfrOmBmNPVinfectedsilkwormmidgutwereCO—cul—turedwithyeastcellscontainingpG

6、BKT7一Pe38．Asaresult，8candidateproteincodinggeneswerefoundtohavehitsinGenBankdatabase．FunctionalsearchesledUStoidentify2proteingenesrelatedtovirusreplication．Sequencingandbioinformaticanalysisrevealedthatthesetwogenesencodedproteins，Bombyxmoriserineproteaseandcatalase，werecandida

7、teproteinsinteractivewithBmNPVPE38proteinKeywordsBmNPV；Bombyxmori；PE38protein；Serineprotease；Catalase；Yeasttwo—hybridsystem家蚕血液型浓病是养蚕生产中最常见和危害较为严重的病害之一_lJ，病害的发生会给养蚕业造成巨大的经济损失，目前养蚕生产上主要通过环收稿日期：2011—03—05接受日期：2012—03—12境消毒对该病害进行预防性控制，尚无有效的治疗资助项目：国家自然科学基金项目(No．31101767)，江苏省研究生培方法。家

8、蚕核型多角体病毒(Bombyxmorinuele．养创新工程(No．CXZZ11_0281)。