棉蚜的羧酸酯酶研究-对有机磷和拟除虫菊酯的抗性

《棉蚜的羧酸酯酶研究-对有机磷和拟除虫菊酯的抗性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

棉蚜的羧酸酯酶研究－对有机磷和拟除虫菊酯的抗性高希武gaoxiwu@263.net.cn

1背景知识

21.由于编码解毒酶基因的DNA扩增导致的过量表达，如桃蚜的酯酶基因；2.基因突变引起的杀虫剂靶标结构变构，如GABA受体和钠离子通道基因；3.调节基因的变化导致的过量表达，如家蝇细胞色素P450基因。杀虫剂抗性的分子机制可分为三种类型：

3酯酶的分类：Aldridge（1953）根据酯酶与有机磷的相互作用把酯酶分为三类：1）A-酯酶，这类酶能耐受有机磷，并把它们作为底物进行水解；2）B-酯酶，这类酶对对氧磷等有机磷很敏感，能被这些有机磷抑制；3）C-酯酶，既不被有机磷抑制，又不能水解这些有机磷。

4Aphisgossypiiresistanttoomtehoate代别Generation(Fi)斜率(slope)LC50(mg/L)抗性指数resistanceindexF01.816±0.286105.487(74.353-151.708)5.107F43.674±0.366450.936(319.436-560.607)21.833F81.362±0.155549.083(352.380-765.225)26.586F122.454±0.2181703.85(1385.055-2125.041)82.498F162.051±0.3671771.723(1064.214-2884.422)85.78F202.070±0.2092575.810(1690.116-5095.187)124.718

5氰戊菊酯抗性选育品系及敏感品系棉蚜的生测结果

6抗性和敏感品系棉蚜动力学常数及同功酶电泳分析

7氧化乐果抗性和敏感品系棉蚜动力学常数的比较

812氧化乐果抗性和敏感棉蚜酯酶同工酶分析1敏感棉蚜2抗性棉蚜E1E2E3E4E5

9敏感品系棉蚜羧酸酯酶同工酶扫描图抗性品系棉蚜羧酸酯酶同工酶扫描图

10抗性和敏感品系棉蚜羧酸酯酶基因的克隆及序列分析

11羧酸酯酶基因的克隆引物设计正向引物CS1：5’-gtGGATCCATGGAAGTCGTCATTGAACAAG-3’BamHI反向引物CA1：5’-gtGAATTCCTAAACAATGGATTCAGATAATTC-3’EcoRI

12M1234kb2.01.00.750.50.250.11.58kb棉蚜羧酸酯酶全长基因的PCR扩增泳道M：标准分子量DL2000；泳道1：未加模板的对照；泳道2：敏感品系(SS)棉蚜cDNA作为模板；泳道3：抗性品系(RR)棉蚜cDNA作为模板；泳道4：敏感品系(WS)棉蚜cDNA作为模板

13M1M212345kb215.12.01.00.750.50.251.58kb0.8kb3.0kbPCR结合酶切鉴定阳性克隆泳道M1和M2：标准分子量/EcoRⅠ+HindⅢ和DL2000；泳道1：PCR阴性对照；泳道2：重组子pGEM/Car-S为模板的PCR扩增；泳道3：重组子pGEM/Car-R为模板的PCR扩增；泳道4：重组子pGEM/Car-S经EcoRⅠ酶切；泳道5：重组子pGEM/Car-R经EcoRⅠ酶切

14双酶切鉴定阳性克隆泳道M1和M2：标准分子量/EcoRⅠ+HindⅢ和DL2000；泳道1：重组子pGEM/Car-S经BamH1和Pst1双酶切；泳道2：重组子pGEM/Car-R经BamH1和Pst1双酶切；泳道3：重组子pGEM/Car-S为模板的PCR扩增；泳道4：重组子pGEM/Car-R为模板的PCR扩增；M1M21234kb215.12.01.00.751.58kb3.0kb

155’ATGGAAGTCGTCATTGAACAAGGTGCTCTAAAAGGACTTAAAAAAAAAACGCTATTGTCAAACAAACCTTACGTCAGTTTTCTAGGCATACCCTACGCTCAACCACCCGTTAACGACTTAAGATTCAAGGCTCCTGTCAAACATCCCGGATGGTCTGGAGTTTTAAATGCTGTTTCAGAAAGAGACAAATGCACGCAGTACGTTTTTATGACGAATCACATCGTTGGAAGTGAAGATTGCTTGTACCTAAATATATCGGTGCCACAGCAGAACGAATTGAATGGAAAACTTGCTGTTATGATATTCATACATGGAGGTGCCTTTAACTATGGCAGTGGGTCAATGAATGAATATTCTCCCGATTATTTTATCGACGAAAACGTGATTGTCGTCACAATAAATTATCGTCTAAACGCCCTAGGATTTCTAAACTTGGATATTGACGAGTGTCCTGGAAACGTGGGCTTGAAAGATCAACTATTTGCAATCAAATGGGTTAAAGCGAATATAGCTGCATTTGGGGGTGATGTAAACAATATCACCATATTCGGTGAAAGTGCAGGATCAGCGTCTGTTCATTATCACACAATATCACCACAATCCAGAGGTTTATTCCAAAAAGCAATTATGCAAAGTGGAAGTGCCTTTAACCCTTGGGCGTTTACTGAAAATCATAAAGCTTCAGCCTATAAGTTAGCCAAAAACTTAGGATGTTTAAGTAATGATCCCAAAGAAATACTAAAATACTTAAAAAATGTATCAGCGATTGATTTAGTGAAAGAAACTGAATTCAAGGACGAAACAGATTTTATGGATTACAAATTTGTCCCATCTATTGAAAGTGATGTGATCAGTAATCCATTTTTACCAGCTCACCCTAAAACTTTAGCCACCTCTACATTTCCAGTACCCGTAATCATTGGAGTTAACAATATGGAAGGAATTGTAGCATTAACTGAGGATAGAATAAGTCTATTTTCCGATGATCACCACATTACAGATGAAATTTCAAAACTATTTAGAAATCGGTACAGTACTGAAACTATAAGTAAAATAAAAAATTTTTATTTTAATAAAAGTAATATCAGTTCTGAAACAATGAAGTTGGAAAACATATGTAACTTGCACAGTGATGTATTTTTTTTCAACGGCGTTTATGAAACCTTCGATTGTTTTTTGAAGCAAAATGGTTCACCAGTTTATGAATACGAATTTAAATTTGACGGGGAACTTAATGGTGCAAAAAACATGATTTTTGCGACGAGACCAATTCTTCGGCACGCAATAAAAGGCGCATGTCATGCGGACGATGTTAATTATTTTTTCCGTGATCTATCTGGGGTAGATCCAAAACCCAACTCTCCGGAACTTGAAATGTGTAAAATGATGTGTAAAATGTGGACAAATTTCGCAAAGACAAGTAATCCCAATTCACCGGATTTAAGTTTCAAGTGGATTAATGCGACCGCATGTGATTTAAAATATCTGTCAATAGATGGAGACAGAACATGTATGACCCAAGGCATGATGAACAATAAAAGATTTCGTTTTTGGAAAGAATTATCTGAATCCATTGTTTAG3’抗性品系棉蚜羧酸酯酶全长基因序列

16敏感品系SS棉蚜羧酸酯酶全长基因序列5’ATGGAAGTCGTCATTGAACAAGGTGCTCTAAAAGGACTTAAAAAAAAAACGCTATTGTCAAACAAACCTTACGTCAGTTTTCTAGGCATACCCTACGCTCAACCACCCGTTAACGACTTAAGATTCAAGGCTCCTGTCAAACATCCCGGATGGTCTGGAGTTTTAAATGCTGTTTCAGAAAGAGACAAATGCACGCAGTACGTTTTTATGACGAATCATATCGTTGGAAGTGAAGATTGCTTGTACCTAAATATATCGGTGCCACAGCAGAACGAATTGAATGGAAAACTTGCTGTTATGATATTCATACATGGAGGTGCCTTTAACTATGGCAGTGGGTCAATGAATGAATATTCTCCCGATTATTTTATCGACGAAAACGTGATTGTCGTCACAATAAATTATCGTCTAAACGCCCTAGGATTTCTAAACTTGGATATTGACGAGTGTCCTGGAAACGTGGGCTTGAAAGATCAACTATTTGCAATCAAATGGGTTAAAGCGAATATAGCTGCATTTGGGGGTGATGTAAACAATATCACCATATTCGGTGAAAGTGCAGGATCAGCGTCTGTTCATTATCACACAATATCACCACAATCCAGAGGTTTATTCCAAAAAGCAATTACGCAAAGTGGAAGTGCCTTTAACCCTTGGGCGTTTACTGAAAATCATAAAGCTTCAGCCTATAAGTTAGCCAAAAACTTAGGATGTTTAAGTAATGATCCCAAAGAAATACTAAAATACTTAAAAAATGTATCAGCGATTGATTTAGTAAAAGAAACTGAATTCAAGGACGAAACAGATTTCATGGATTACAAATTTGTCCCATCTATTGAAAGTGATGTGATCAGTAATCCATTTTTACCAGCTCACCCTAATACTTTAGCCACCTCTACATTTCCAGTACCCGTAATCATTGGAGTTAACAATATGGAAGGAATTGTAGCATTAACTGAGGATAGAATAAGTCTATTTTCCGATGATCACCACATTACAGATGAAATTTCAAAACTATTTAGAAATCGGTACAGTACTGAAACTATAAGTAAAATAAAAAATTTTTATTTTAATAAAAGTAATATCAGTTCTGAAACAATGAAGTTGGAAAACATATGTAACTTGCACAGTGATGTATTTTTTTTCAACGGCGTTTATGAAACCTTCGATTGTTTTCTGAAGCAAAATGGTTCACCAGTTTATGAATACGAATTTAAATTTGGCGGGGAACTTAATGGTGCAAAAAACATGATTTTTGCGACGAGACCAATTCTTCGGCACGCAATAAAAGGCGCATGTCATGCGGACGATGTTAATTATTCTTTCCGTGATCTATCTGGGGTAGATCCAAAACCCAACTCTCCGGAACTTGAAATGTGTAAAATGATGTGTAAAATGTGGACAAATTTCGCAAAGACAAGTAATCCCAATTCACCGGATTTAAGTTTCAAGTGGATTAATGCGACCGCATGTGATTTAAAATATCTGTCAATAGATGGAGACAGAACATGTATGATCCAAGGCATGATGAACAATAAAAGATTTCGTTTTTGGAAAGAATTATCTGAATCCATTGTTTAG3’

17敏感品系WS棉蚜羧酸酯酶全长基因序列5’ATGGAAGTCGTCATTGAACAAGGTGCTCTAAAAGGACTTAAAAAAAAAACGCTATTGTCAAACAAACCTTACGTCAGTTTTCTAGGCATACCCTACGCTCAACCACCCGTTAACGACTTAAGATTCAAGGCTCCTGTCAAACATCCCGGATGGTCTGGAGTTTTAAATGCTGTTTCAGAAAGAGACAAATGCACGCAGTACGTTTTTATGACGAATCATATCGTTGGAAGTGAAGATTGCTTGTACCTAAATATATCGGTGCCACAGCAGAACGAATTGAATGGAAAACTTGCTGTTATGATATTCATACATGGAGGTGCCTTTAACTATGGCAGTGGGTCAATGAATGAATATTCTCCCGATTATTTTATCGACGAAAACGTGATTGTCGTCACAATAAATTATCGTCTAAACGCCCTAGGATTTCTAAACTTGGATATTGACGAGTGTCCTGGAAACGTGGGCTTGAAAGATCAACTATTTGCAATCAAATGGGTTAAAGCGAATATAGCTGCATTTGGGGGTGATGTAAACAATATCACCATATTCGGTGAAAGTGCAGGATCAGCGTCTGTTCATTATCACACAATATCACCACAATCCAGAGGTTTATTCCAAAAAGCAATTACGCAAAGTGGAAGTGCCTTTAACCCTTGGGCGTTTACTGAAAATCATAAAGCTTCAGCCTATAAGTTAGCCAAAAACTTAGGATGTTTAAGTAATGATCCCAAAGAAATACTAAAATACTTAAAAAATGTATCAGCGATTGATTTAGTAAAAGAAACTGAATTCAAGGACGAAACAGATTTCATGGATTACAAATTTGTCCCATCTATTGAAAGTGATGTGATCAGTAATCCATTTTTACCAGCTCACCCTAATACTTTAGCCACCTCTACATTTCCAGTACCCGTAATCATTGGAGTTAACAATATGGAAGGAATTGTAGCATTAACTGAGGATAGAATAAGTCTATTTTCCGATGATCACCACATTACAGATGAAATTTCAAAACTATTTAGAAATCGGTACAGTACTGAAACTATAAGTAAAATAAAAAATTTTTATTTTAATAAAAGTAATATCAGTTCTGAAACAATGAAGTTGGAAAACATATGTAACTTGCACAGTGATGTATTTTTTTTCAACGGCGTTTATGAAACCTTCGATTGTTTTCTGAAGCAAAATGGTTCACCAGTTTATGAATACGAATTTAAATTTGGCGGGGAACTTAATGGTGCAAAAAACATGATTTTTGCGACGAGACCAATTCTTCGGCACGCAATAAAAGGCGCATGTCATGCGGACGATGTTAATTATTCTTTCCGTGATCTATCTGGGGTAGATCCAAAACCCAACTCTCCGGAACTTGAAATGTGTAAAATGATGTGTAAAATGTGGACAAATTTCGCAAAGACAAGTAATCCCAATTCACCGGATTTAAGTTTCAAGTGGATTAATGCGACCGCATGTGATTTAAAATATCTGTCAATAGATGGAGACAGAACATGTATGATCCAAGGCATGATGAACAATAAAAGATTTCGTTTTTGGAAAGAATTATCTGAATCCATTGTTTAG3’

18RRATGGAAGTCGTCATTGAACAAGGTGCTCTAAAAGGACTTAAAAAAAAAAC50SSATGGAAGTCGTCATTGAACAAGGTGCTCTAAAAGGACTTAAAAAAAAAAC50WSATGGAAGTCGTCATTGAACAAGGTGCTCTAAAAGGACTTAAAAAAAAAAC50RRGCTATTGTCAAACAAACCTTACGTCAGTTTTCTAGGCATACCCTACGCTC100SSGCTATTGTCAAACAAACCTTACGTCAGTTTTCTAGGCATACCCTACGCTC100WSGCTATTGTCAAACAAACCTTACGTCAGTTTTCTAGGCATACCCTACGCTC100RRAACCACCCGTTAACGACTTAAGATTCAAGGCTCCTGTCAAACATCCCGGA150SSAACCACCCGTTAACGACTTAAGATTCAAGGCTCCTGTCAAACATCCCGGA150WSAACCACCCGTTAACGACTTAAGATTCAAGGCTCCTGTCAAACATCCCGGA150RRTGGTCTGGAGTTTTAAATGCTGTTTCAGAAAGAGACAAATGCACGCAGTA200SSTGGTCTGGAGTTTTAAATGCTGTTTCAGAAAGAGACAAATGCACGCAGTA200WSTGGTCTGGAGTTTTAAATGCTGTTTCAGAAAGAGACAAATGCACGCAGTA200RRCGTTTTTATGACGAATCACATCGTTGGAAGTGAAGATTGCTTGTACCTAA250SSCGTTTTTATGACGAATCACATCGTTGGAAGTGAAGATTGCTTGTACCTAA250WSCGTTTTTATGACGAATCATATCGTTGGAAGTGAAGATTGCTTGTACCTAA250RRATATATCGGTGCCACAGCAGAACGAATTGAATGGAAAACTTGCTGTTATG300SSATATATCGGTGCCACAGCAGAACGAATTGAATGGAAAACTTGCTGTTATG300WSATATATCGGTGCCACAGCAGAACGAATTGAATGGAAAACTTGCTGTTATG300

19RRATATTCATACATGGAGGTGCCTTTAACTATGGCAGTGGGTCAATGAATGA350SSATATTCATACATGGAGGTGCCTTTAACTATGGCAGTGGGTCAATGAATGA350WSATATTCATACATGGAGGTGCCTTTAACTATGGCAGTGGGTCAATGAATGA350RRATATTCTCCCGATTATTTTATCGACGAAAACGTGATTGTCGTCACAATAA400SSATATTCTCCCGATTATTTTATCGACGAAAACGTGATTGTCGTCACAATAA400WSATATTCTCCCGATTATTTTATCGACGAAAACGTGATTGTCGTCACAATAA400RRATTATCGTCTAAACGCCCTAGGATTTCTAAACTTGGATATTGACGAGTGT450SSATTATCGTCTAAACGCCCTAGGATTTCTGAACTTGGATATTGACGAGTGT450WSATTATCGTCTAAACGCCCTAGGATTTCTAAACTTGGATATTGACGAGTGT450RRCCTGGAAACGTGGGCTTGAAAGATCAACTATTTGCAATCAAATGGGTTAA500SSCCTGGAAACGTGGGCTTGAAAGATCAACTATTTGCAATCAAATGGGTTAA500WSCCTGGAAACGTGGGCTTGAAAGATCAACTATTTGCAATCAAATGGGTTAA500RRAGCGAATATAGCTGCATTTGGGGGTGATGTAAACAATATCACCATATTCG550SSAGCGAATATAGCTGCATTTGGGGGTGATGTAAACAATATCACCATATTCG550WSAGCGAATATAGCTGCATTTGGGGGTGATGTAAACAATATCACCATATTCG550RRGTGAAAGTGCAGGATCAGCGTCTGTTCATTATCACACAATATCACCACAA600SSGTGAAAGTGCAGGATCAGCGTCTGTTCATTATCACACAATATCACCACAA600WSGTGAAAGTGCAGGATCAGCGTCTGTTCATTATCACACAATATCACCACAA600

20RRTCCAGAGGTTTATTCCAAAAAGCAATTATGCAAAGTGGAAGTGCCTTTAA650SSTCCAGAGGTTTATTCCAAAAAGCAATTACGCAAAGTGGAAGTGCCTTTAA650WSTCCAGAGGTTTATTCCAAAAAGCAATTACGCAAAGTGGAAGTGCCTTTAA650RRCCCTTGGGCGTTTACTGAAAATCATAAAGCTTCAGCCTATAAGTTAGCCA700SSCCCTTGGGCGTTCACTGAAAATCATAAAGCTTCAGCCTATAAGTTAGCCA700WSCCCTTGGGCGTTTACTGAAAATCATAAAGCTTCAGCCTATAAGTTAGCCA700RRAAAACTTAGGATGTTTAAGTAATGATCCCAAAGAAATACTAAAATACTTA750SSAAAACTTAGGATGTTTAAGTAATGATCCCAAAGAAATACTAAAATACTTA750WSAAAACTTAGGATGTTTAAGTAATGATCCCAAAGAAATACTAAAATACTTA750RRAAAAATGTATCAGCGATTGATTTAGTGAAAGAAACTGAATTCAAGGACGA800SSAAAAATGTATCAGCGATTGATTTAGTGAAAGAAACTGAATTCAAGGACGA800WSAAAAATGTATCAGCGATTGATTTAGTAAAAGAAACTGAATTCAAGGACGA800RRAACAGATTTTATGGATTACAAATTTGTCCCATCTATTGAAAGTGATGTGA850SSAACAGATTTTATGGATTACAAATTTGTCCCATCTATTGAAAGTGATGTGA850WSAACAGATTTCATGGATTACAAATTTGTCCCATCTATTGAAAGTGATGTGA850RRTCAGTAATCCATTTTTACCAGCTCACCCTAAAACTTTAGCCACCTCTACA900SSTCAGTAATCCATTTTTACCAGCTCACCCTAATACTTTAGCCACCTCTACA900WSTCAGTAATCCATTTTTACCAGCTCACCCTAATACTTTAGCCACCTCTACA900

21RRTTTCCAGTACCCGTAATCATTGGAGTTAACAATATGGAAGGAATTGTAGC950SSTTTCCAGTACCCGTAATCATTGGAGTTAACAATATGGAAGGAATTGTAGC950WSTTTCCAGTACCCGTAATCATTGGAGTTAACAATATGGAAGGAATTGTAGC950RRATTAACTGAGGATAGAATAAGTCTATTTTCCGATGATCACCACATTACAG1000SSATTAACTGAGGATAGAATAAGTCTATTTTCCGATGATCACCACATTACAG1000WSATTAACTGAGGATAGAATAAGTCTATTTTCCGATGATCACCACATTACAG1000RRATGAAATTTCAAAACTATTTAGAAATCGGTACAGTACTGAAACTATAAGT1050SSATGAAATTTCAAAACTATTTAGAAATCGGTACAGTACTGAAACTATAAGT1050WSATGAAATTTCAAAACTATTTAGAAATCGGTACAGTACTGAAACTATAAGT1050RRAAAATAAAAAATTTTTATTTTAATAAAAGTAATATCAGTTCTGAAACAAT1100SSAAAATAAAAAATTTTTATTTTAATAAAAGTAATATCAGTTCTGAAACAAT1100WSAAAATAAAAAATTTTTATTTTAATAAAAGTAATATCAGTTCTGAAACAAT1100RRGAAGTTGGAAAACATATGTAACTTGCACAGTGATGTATTTTTTTTCAACG1150SSGAAGTTGGAAAACATATGTAACTTGCACAGTGATGTATTTTTTTTCAACG1150WSGAAGTTGGAAAACATATGTAACTTGCACAGTGATGTATTTTTTTTCAACG1150RRGCGTTTATGAAACCTTCGATTGTTTTTTGAAGCAAAATGGTTCACCAGTT1200SSGCGTTTATGAAACCTTCGATTGTTTTTTGAAGCAAAATGGTTCACCAGTT1200WSGCGTTTATGAAACCTTCGATTGTTTTCTGAAGCAAAATGGTTCACCAGTT1200

22RRTATGAATACGAATTTAAATTTGACGGGGAACTTAATGGTGCAAAAAACAT1250SSTATGAATACGAATTTAAATTTGGCGGGGAACTTAATGGTGCAAAAAACAT1250WSTATGAATACGAATTTAAATTTGGCGGGGAACTTAATGGTGCAAAAAACAT1250RRGATTTTTGCGACGAGACCAATTCTTCGGCACGCAATAAAAGGCGCATGTC1300SSGATTTTTGCGACGAGACCAATTCTTCGGCACGCAATAAAAGGCGCATGTC1300WSGATTTTTGCGACGAGACCAATTCTTCGGCACGCAATAAAAGGCGCATGTC1300RRATGCGGACGATGTTAATTATTTTTTCCGTGATCTATCTGGGGTAGATCCA1350SSATGCGGACGATGTTAATTATTCTTTCCGTGATCTATCTGGGGTAGATCCA1350WSATGCGGACGATGTTAATTATTCTTTCCGTGATCTATCTGGGGTAGATCCA1350RRAAACCCAACTCTCCGGAACTTGAAATGTGTAAAATGATGTGTAAAATGTG1400SSAAACCCAACTCTCCGGAACTTGAAATGTGTAAAATGATGTGTAAAATGTG1400WSAAACCCAACTCTCCGGAACTTGAAATGTGTAAAATGATGTGTAAAATGTG1400RRGACAAATTTCGCAAAGACAAGTAATCCCAATTCACCGGATTTAAGTTTCA1450SSGACAAATTTCGCAAAGACAAGTAATCCCAATTCACCGGATTTAAGTTTCA1450WSGACAAATTTCGCAAAGACAAGTAATCCCAATTCACCGGATTTAAGTTTCA1450RRAGTGGATTAATGCGACCGCATGTGATTTAAAATATCTGTCAATAGATGGA1500SSAGTGGATTAATGCGACCGCATGTGATTTAAAATATCTGTCAATAGATGGA1500WSAGTGGATTAATGCGACCGCATGTGATTTAAAATATCTGTCAATAGATGGA1500

23RR:MEVVIEQGALKGLKKKTLLSNKPYVSFLGIPYAQPPVNDLRFKAPVKHPG50WS:MEVVIEQGALKGLKKKTLLSNKPYVSFLGIPYAQPPVNDLRFKAPVKHPG50SS:MEVVIEQGALKGLKKKTLLSNKPYVSFLGIPYAQPPVNDLRFKAPVKHPG50RR:WSGVLNAVSERDKCTQYVFMTNHIVGSEDCLYLNISVPQQNELNGKLAVM100WS:WSGVLNAVSERDKCTQYVFMTNHIVGSEDCLYLNISVPQQNELNGKLAVM100SS:WSGVLNAVSERDKCTQYVFMTNHIVGSEDCLYLNISVPQQNELNGKLAVM100RR:IFIHGGAFNYGSGSMNEYSPDYFIDENVIVVTINYRLNALGFLNLDIDEC150WS:IFIHGGAFNYGSGSMNEYSPDYFIDENVIVVTINYRLNALGFLNLDIDEC150SS:IFIHGGAFNYGSGSMNEYSPDYFIDENVIVVTINYRLNALGFLNLDIDEC150**RR:PGNVGLKDQLFAIKWVKANIAAFGGDVNNITIFGESAGSASVHYHTISPQ200WS:PGNVGLKDQLFAIKWVKANIAAFGGDVNNITIFGESAGSASVHYHTISPQ200SS:PGNVGLKDQLFAIKWVKANIAAFGGDVNNITIFGESAGSASVHYHTISPQ200×*RR:SRGLFQKAIMQSGSAFNPWAFTENHKASAYKLAKNLGCLSNDPKEILKYL250WS:SRGLFQKAITQSGSAFNPWAFTENHKASAYKLAKNLGCLSNDPKEILKYL250SS:SRGLFQKAITQSGSAFNPWAFTENHKASAYKLAKNLGCLSNDPKEILKYL250RR:KNVSAIDLVKETEFKDETDFMDYKFVPSIESDVISNPFLPAHPKTLATST300WS:KNVSAIDLVKETEFKDETDFMDYKFVPSIESDVISNPFLPAHPNTLATST300SS:KNVSAIDLVKETEFKDETDFMDYKFVPSIESDVISNPFLPAHPNTLATST300

24RR:FPVPVIIGVNNMEGIVALTEDRISLFSDDHHITDEISKLFRNRYSTETIS350WS:FPVPVIIGVNNMEGIVALTEDRISLFSDDHHITDEISKLFRNRYSTETIS350SS:FPVPVIIGVNNMEGIVALTEDRISLFSDDHHITDEISKLFRNRYSTETIS350×RR:KIKNFYFNKSNISSETMKLENICNLHSDVFFFNGVYETFDCFLKQNGSPV400WS:KIKNFYFNKSNISSETMKLENICNLHSDVFFFNGVYETFDCFLKQNGSPV400SS:KIKNFYFNKSNISSETMKLENICNLHSDVFFFNGVYETFDCFLKQNGSPV400RR:YEYEFKFDGELNGAKNMIFATRPILRHAIKGACHADDVNYFFRDLSGVDP450WS:YEYEFKFGGELNGAKNMIFATRPILRHAIKGACHADDVNYSFRDLSGVDP450SS:YEYEFKFGGELNGAKNMIFATRPILRHAIKGACHADDVNYSFRDLSGVDP450×RR:KPNSPELEMCKMMCKMWTNFAKTSNPNSPDLSFKWINATACDLKYLSIDG500WS:KPNSPELEMCKMMCKMWTNFAKTSNPNSPDLSFKWINATACDLKYLSIDG500SS:KPNSPELEMCKMMCKMWTNFAKTSNPNSPDLSFKWINATACDLKYLSIDG500RR:DRTCMIQGMMNNKRFRFWKELSESIV*550WS:DRTCMIQGMMNNKRFRFWKELSESIV*550SS:DRTCMIQGMMNNKRFRFWKELSESIV*550抗性和敏感品系棉蚜羧酸酯酶氨基酸序列比较RR:有机磷抗性品系；WS；SS

25敏感棉蚜羧酸酯酶的二级结构预测150160170180190200210GFLNLDIDECPGNVGLKDQLFAIKWVKANIAAFGGDVNNITIFGESAGSASVHYHTISPQSRGLFQKAITHELIXhhhhhhHHHHHHHHHHHHHHHHHHhhhHHhhhhHhhhhhhhSHEETSSSSSSsssssssssssssssssssssSSSSSSSSsSssSSSSSsTURNTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCOILCCCCC抗性棉蚜羧酸酯酶的二级结构预测150160170180190200210GFLNLDIDECPGNVGLKDQLFAIKWVKANIAAFGGDVNNITIFGESAGSASVHYHTISPQSRGLFQKAIMHELIXhhhhhhHHHHHHHHHHHHHHHHHHhhhHHhhhhHhHHHHHhSHEETSSSSSSsssssssssssssssssssssSSSSSSSSsSssssssssTURNTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCOILCCCCC

26敏感棉蚜羧酸酯酶的二级结构预测290300310320330340350SDVISNPFLPAHPNTLATSTFPVPVIIGVNNMEGIVALTEDRISLFSDDHHITDEISKLFRNRYSTETISHELIXhhhhhhhHhhhHHHHHHHHhhhhhHHHHHHHHHSHEETsSSSSsSSSSSSSsssssssssssSSSssssssssssSssssssSSTURNTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCOILCCCCC抗性棉蚜羧酸酯酶的二级结构预测290300310320330340350SDVISNPFLPAHPKTLATSTFPVPVIIGVNNMEGIVALTEDRISLFSDDHHITDEISKLFRNRYSTETISHELIXhhhhhhhHhhhHHHHHHHHhhhhhHHHHHHHHHSHEETsSSSSsSSSSSSSsssssssssssSSSssssssssssSssssssSSTURNTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCOILCCCCC

27敏感棉蚜羧酸酯酶的二级结构预测360370380390400410420KIKNFYFNKSNISSETMKLENICNLHSDVFFFNGVYETFDCFLKQNGSPVYEYEFKFGGELNGAKNMIFAHELIXhhHHHHHHHhhhhhhhhhhhhhhhhhHhhHHHHHHHHHhhhhSHEETSSSSSSSsssssssSSssSSSSSSSSSSSSSssssssssssSSSSTURNTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCOILCCCCCC抗性棉蚜羧酸酯酶的二级结构预测360370380390400410420KIKNFYFNKSNISSETMKLENICNLHSDVFFFNGVYETFDCFLKQNGSPVYEYEFKFDGELNGAKNMIFAHELIXhhHHHHHHHhhhhhhhhhhhhhhhhhHhhHHHHHhhHHHhhhhSHEETSSSSSSSsssssssSSssSSSSSSSSSSSSSssssssssssSSSSTURNTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCOILCCC

28敏感棉蚜羧酸酯酶的二级结构预测430440450460470480490TRPILRHAIKGACHADDVNYSFRDLSGVDPKPNSPELEMCKMMCKMWTNFAKTSNPNSPDLSFKWINATAHELIXhhhhhhHHHHHHHhhhhHHHHHHHHHHHHHHHhhhhhhhhhhhSHEETSSSSSSsssssssssssssssssssSSSSSSSSSTURNTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCOILCCCCCC抗性棉蚜羧酸酯酶的二级结构预测430440450460470480490TRPILRHAIKGACHADDVNYFFRDLSGVDPKPNSPELEMCKMMCKMWTNFAKTSNPNSPDLSFKWINATAHELIXhhhhhhHHHHHHHhhhhHHHHHHHHHHHHHHHhhhhhhhhhhhSHEETSSSSSSssssSSSSSsssssssssssssssSSSSSSSSSTURNTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCOILCCC

29棉蚜羧酸酯酶基因的体外表达

30BamHI+SalIBamHI+SalI诱导表达产物纯化及鉴定

3111抗性棉蚜羧酸酯酶表达产物的SDS-PAGE检测泳道1：未诱导的表达产物；泳道2：诱导的表达产物；泳道3：蛋白Marker123kD97.466.243.031.0

32E12抗性棉蚜羧酸酯酶基因体外表达产物1为羧酸酯酶基因原核表达产物，2为抗性棉蚜品系